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液氮冷凍研磨機(jī)提取RNA步驟探討
閱讀：2464發(fā)布時間：2020-5-22
液氮冷凍研磨機(jī)采用電磁撞子研磨技術(shù),，將裝有樣品的密閉容器浸入液氮，在超低溫環(huán)境下,，利用電磁驅(qū)動鋼制撞子往復(fù)撞擊樣品,，快速*地粉碎樣品。*的研磨方式相比傳統(tǒng)研磨,，研磨時間更短,，研磨樣品更為精細(xì)。
液氮冷凍研磨機(jī)的設(shè)計人性化,、安全高效,、耐用、操作簡單,、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好,、避免樣品間的交叉污染，適應(yīng)不同客戶的各種需求,，是*的“研磨手段”,，廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、動植物,、醫(yī)學(xué),、礦物學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域,。
液氮冷凍研磨提取RNA該如何進(jìn)行,？一起來看看：
1.用75%酒精對實驗操作臺、移液槍,、槍頭盒,、管架進(jìn)行消毒，然后再用RNase Zap擦拭上述材料,。
2.取出-80℃冰箱保存的組織塊,，放于用液氮預(yù)冷過的研缽中，敲碎一小塊組織,，其余放回凍存管,。
3.加入液氮，先輕輕敲碎組織到小塊,，再研磨成粉末,，直到看不到組織塊。
4.加入液氮使粉末凝聚成團(tuán),，馬上用藥勺把粉末轉(zhuǎn)移到2.0ml EP管中,。
5.待液氮揮發(fā)干后，加入1ml Trizol裂解液，用1ml移液器將細(xì)胞吹散開,，保證細(xì)胞裂解充分,，必要時可借助水平振蕩器混勻。
6.4℃離心機(jī)12000rpm離心5分鐘,，棄沉淀,。
7.加入CHCl3，比例200ul CHCl3/ml Trizol,，顛倒混勻,，室溫放置15分鐘。
8.于4℃離心機(jī)12000g離心15分鐘,。取上清液,，注意吸取上清是無觸碰到中間層或下層。
9.取上清液,，注意吸取上清是無觸碰到中間層或下層,。
10.加入等體積異丙醇，-20℃沉淀1小時,。
11.于4℃離心機(jī)12000g離心10分鐘,。
12.棄上清，加入1ml 75%酒精漂洗沉淀,，于4℃離心機(jī)800g離心5分鐘,。必要時可重復(fù)酒精洗滌。
13.棄上清,，可選擇再次離心去除殘留的乙醇,，沉淀在安全柜內(nèi)晾干，切忌過干,，只需目測乙醇揮發(fā)干即可,。
14.根據(jù)沉淀的大小,，使用無RNA酶的水將RNA沉淀充分溶解,。選擇溶解沉淀的體積，一般為30-100ul,。測RNA濃度,，此方法RNA A260/A280值在1.6-1.8之間。
15.電泳檢測RNA完整性,，0.5XTBE Buffer,，110V電泳30分鐘。
16.后將沉淀保存在-80℃低溫冰箱,。
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