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液氮冷凍研磨機(jī)提取RNA步驟探討
閱讀：2351發(fā)布時(shí)間：2020-5-22
液氮冷凍研磨機(jī)采用電磁撞子研磨技術(shù),，將裝有樣品的密閉容器浸入液氮,，在超低溫環(huán)境下,，利用電磁驅(qū)動(dòng)鋼制撞子往復(fù)撞擊樣品,，快速*地粉碎樣品,。*的研磨方式相比傳統(tǒng)研磨，研磨時(shí)間更短,，研磨樣品更為精細(xì),。
液氮冷凍研磨機(jī)的設(shè)計(jì)人性化,、安全高效、耐用,、操作簡(jiǎn)單,、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好、避免樣品間的交叉污染,，適應(yīng)不同客戶的各種需求,，是*的“研磨手段”，廣泛應(yīng)用于生物化學(xué),、動(dòng)植物,、醫(yī)學(xué)、礦物學(xué),、材料科學(xué)等領(lǐng)域,。
液氮冷凍研磨提取RNA該如何進(jìn)行？一起來(lái)看看：
1.用75%酒精對(duì)實(shí)驗(yàn)操作臺(tái),、移液槍,、槍頭盒、管架進(jìn)行消毒,，然后再用RNase Zap擦拭上述材料,。
2.取出-80℃冰箱保存的組織塊，放于用液氮預(yù)冷過(guò)的研缽中,，敲碎一小塊組織,，其余放回凍存管。
3.加入液氮,，先輕輕敲碎組織到小塊,，再研磨成粉末，直到看不到組織塊,。
4.加入液氮使粉末凝聚成團(tuán),，馬上用藥勺把粉末轉(zhuǎn)移到2.0ml EP管中。
5.待液氮揮發(fā)干后,，加入1ml Trizol裂解液,，用1ml移液器將細(xì)胞吹散開(kāi)，保證細(xì)胞裂解充分,，必要時(shí)可借助水平振蕩器混勻,。
6.4℃離心機(jī)12000rpm離心5分鐘，棄沉淀,。
7.加入CHCl3,，比例200ul CHCl3/ml Trizol，顛倒混勻，室溫放置15分鐘,。
8.于4℃離心機(jī)12000g離心15分鐘,。取上清液，注意吸取上清是無(wú)觸碰到中間層或下層,。
9.取上清液,，注意吸取上清是無(wú)觸碰到中間層或下層。
10.加入等體積異丙醇,，-20℃沉淀1小時(shí),。
11.于4℃離心機(jī)12000g離心10分鐘。
12.棄上清,，加入1ml 75%酒精漂洗沉淀,，于4℃離心機(jī)800g離心5分鐘。必要時(shí)可重復(fù)酒精洗滌,。
13.棄上清,，可選擇再次離心去除殘留的乙醇，沉淀在安全柜內(nèi)晾干,，切忌過(guò)干,，只需目測(cè)乙醇揮發(fā)干即可。
14.根據(jù)沉淀的大小,，使用無(wú)RNA酶的水將RNA沉淀充分溶解,。選擇溶解沉淀的體積，一般為30-100ul,。測(cè)RNA濃度，此方法RNA A260/A280值在1.6-1.8之間,。
15.電泳檢測(cè)RNA完整性,，0.5XTBE Buffer，110V電泳30分鐘,。
16.后將沉淀保存在-80℃低溫冰箱,。
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