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使用SPEX組織研磨儀鑒定中藥材“銀柴胡”
閱讀：2763發(fā)布時間：2020-3-25
“銀柴胡”是中醫(yī)藥中清肺的常用中藥材,。銀柴胡的功效是清虛熱、除疳熱,，銀柴胡的作用是治陰虛發(fā)熱,、骨蒸勞熱,、小兒疳積發(fā)熱，銀柴胡用藥禁忌是外感風寒及血虛,。（具體用藥,，請遵照醫(yī)生遺囑，使用專業(yè)醫(yī)師開具的藥方）
| 銀柴胡 《本草求原》：清肺,、胃,、脾、腎熱,，兼能涼血,。 《綱目拾遺》：謂熱在骨髓，非銀柴胡莫療,，用以治虛勞肌熱骨蒸,，勞瘧熱從髓出及小兒五疳贏熱，蓋退熱而不苦泄,，理陰而不升騰,，固虛熱之良藥。 |
銀柴胡作為在臨床及中成藥生產(chǎn)中應用廣泛的中藥材, 部分混偽品流入市場, 直接影響著相關中藥的質量及臨床用藥安全,。由于受鑒定人員經(jīng)驗,、種質資源、藥材采收時期等因素影響, 利用傳統(tǒng)生藥鑒定的方法已經(jīng)難以滿足銀柴胡真?zhèn)舞b定的需求,。
中文核心期刊《藥學學報》2019年05期中,，一篇來自寧夏中藥材開發(fā)與利用工程技術研究中心李軍等人：“中藥材銀柴胡及其混偽品的DNA條形碼鑒定研究”的文中，選取4種候選條形碼序列ITS,、psbA-trnH,、rbcL 和matK, 以PCR擴增和測序成功率、遺傳距離,、變異率,、Barcoding gap 及進化樹等為指標, 分析其對銀柴胡及其混偽品的鑒別情況。
文中使用篩選合適的DNA條形碼序列,以建立基于DNA條形碼技術的銀柴胡及其混偽品鑒定方法,。該研究團隊共收集了60份銀柴胡及其混偽品,，進行DNA提取：取經(jīng)鑒定的銀柴胡及其混偽品基原植物樣品30 mg, 干燥藥材去除表皮取中間部分50 mg,加入GP1 緩沖液和鋼珠2 枚, 經(jīng)高通量組織研磨機（美國SPEX公司 Geno 2010）研磨4 或6 min 后, 采用DNA 提取試劑盒提取總DNA,詳細操作參照試劑盒說明書,。
SPEX 高通量組織研磨儀,，可一批次處理6塊深孔板，共576個樣品,，可進行干磨,、濕磨、低溫研磨,，可快速粉碎樣品,，并保障樣品完整性,，對研磨中藥材非常有效，是中藥材研究的利器,。
而后對4種DNA條形碼序列ITS,、psb A-trn H、rbc L和mat K進行PCR擴增和測序,計算各序列PCR擴增和測序成功率;利用MEGA7.0分析序列特征,、計算遺傳距離,并構建Neighbour-joining (NJ)系統(tǒng)進化樹;利用種間種內(nèi)變異分析做Barcoding gap圖;運用BLAST方法計算各序列鑒定成功率,通過以上指標綜合評價不同序列的鑒別能力,。
結果顯示, ITS序列的PCR擴增及測序成功率zui高,為95.2%, matK低,為75%; 4種序列的長度范圍為211～797 bp, ITS的GC含量在各序列中zui高,為54.35%; matK和ITS的鑒定成功率較高,分別為92%和90%; Barcoding gap圖顯示ITS有明顯的間隔區(qū), rbc L、mat K和psb A-trn H序列間隔區(qū)不明顯或種間種內(nèi)變異有部分重疊; NJ系統(tǒng)進化樹顯示, ITS可將銀柴胡聚為一支,同屬混偽品二柱繁縷與銀柴胡明顯分為不同支, rbc L和mat K不能把混偽品二柱繁縷分開,。因此, ITS序列可作為銀柴胡及其混偽品鑒定的優(yōu)選條形碼序列,為銀柴胡的真?zhèn)舞b定提供科學依據(jù),。
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