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一種從熱帶木本植物中提取核酸的無毒組織研磨的方法
閱讀：2516發(fā)布時(shí)間：2019-12-19
木本熱帶植物中含有大量復(fù)雜的有機(jī)化合物，這些有機(jī)化合物會抑制提取RNA或DNA所需的化學(xué)程序,，從而不利于后續(xù)研究及應(yīng)用,，如RNA測序和基因表達(dá)分析。為了克服這個(gè)問題,，研究人員必須使用CTAB / PVP緩沖液的提取方案,，而不能使用市售的DNA / RNA提取試劑盒。但是,，這種提取方式耗時(shí)長,、需使用有毒化學(xué)品（例如苯酚和CHCl3），并且一次只能處理少量樣品,。為了克服這些問題,，我們開發(fā)了一種基于CTAB / PVP的新方法，用于RNA或DNA提取,，去掉了傳統(tǒng)方法中的苯酚/CHCl3步驟,。此外，該方法同樣適用于96孔深孔板,，使用SPEX高通量組織研磨儀,，一次研磨6塊深孔板,，同時(shí)處理576個(gè)樣品,，大大加快了處理速度。
我們的新方法，能夠從夏威夷果,、牛油果和芒果組織中,，成功提取RNA，這些組織使用傳統(tǒng)方法很難提取到RNA,。而后我們還驗(yàn)證了,，該方法提取的RNA成功地合成cDNA，以進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR并生成高質(zhì)量的RNA-Seq庫,。該方法經(jīng)輕微改動(dòng)后,，可用于從不同的熱帶和亞熱帶樹種中快速提取DNA。
這種方法可以更安全,、更快速地從困難樣品中提取DNA和RNA,，從而為將來在熱帶樹木上的研究提供了便利。
一種無毒組織研磨從熱帶木本植物中提取核酸的方法,，可用于基因表達(dá)和測序
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