酵母菌是基因表達研究和重組蛋白生產(chǎn)的通用宿主,。然而，傳統(tǒng)酶解法進行酵母mRNA和內(nèi)容蛋白提取通常非常困難,。我們以細胞總RNA提取為例,，對各種酵母破壁方法進行比較。我們用不同的方法對酵母菌破壁,，然后用Trizol試劑進行RNA的提取,，zui后進行電泳檢測，發(fā)現(xiàn)不同破壁方法效果如下：

SPEX公司Freezer/Mill冷凍研磨儀將上述液氮研磨法進一步改良,，使酵母破壁這樣的實驗更加簡單,，無人值守即可完成。將樣品裝入密閉的研磨容器,，浸入液氮,，采用電磁振蕩技術(shù),，電磁往復(fù)驅(qū)動鋼制撞子，振蕩裝機樣品,，動能慣性更大,，實現(xiàn)高動能撞子大面積撞擊，快速粉碎研磨,。過程中,，樣品始終處于液氮溫度（-196°C）。

實驗方法：

*步：將樣品研磨罐預(yù)冷凍,。

第二步：將酵母菌液加入液氮中,，控制速度，使菌液進入液氮中后形成小顆粒,。將菌體液氮顆粒轉(zhuǎn)入研磨罐中,。放入冷凍研磨儀的樣品倉。

第三步：設(shè)置研磨程序,，預(yù)冷10-15min,，研磨2min，15個循環(huán),，兩次研磨之間間歇1min,。

實驗結(jié)果：

經(jīng)檢驗，用此法能使得90%以上的酵母細胞破壁,。酵母的RNA和細胞內(nèi)蛋白保持高活性,。

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