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一種從熱帶木本植物中無毒組織研磨提取核酸的方法
閱讀：4752發(fā)布時間：2019-12-19
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木本熱帶植物中含有大量復(fù)雜的有機化合物,，這些有機化合物會抑制提取RNA或DNA所需的化學(xué)程序,，從而不利于后續(xù)研究及應(yīng)用,，如RNA測序和基因表達分析。為了克服這個問題,，研究人員必須使用CTAB / PVP緩沖液的提取方案,，而不能使用市售的DNA / RNA提取試劑盒。但是,，這種提取方式耗時長,、需使用有毒化學(xué)品（例如苯酚和CHCl3），并且一次只能處理少量樣品,。為了克服這些問題,，我們開發(fā)了一種基于CTAB / PVP的新方法，用于RNA或DNA提取,，去掉了傳統(tǒng)方法中的苯酚/CHCl3步驟,。此外，該方法同樣適用于96孔深孔板,，使用SPEX高通量組織研磨儀,，一次研磨6塊深孔板，同時處理576個樣品,，大大加快了處理速度,。
我們的新方法，能夠從夏威夷果,、牛油果和芒果組織中,，成功提取RNA，這些組織使用傳統(tǒng)方法很難提取到RNA,。而后我們還驗證了,，該方法提取的RNA成功地合成cDNA，以進行實時定量PCR并生成高質(zhì)量的RNA-Seq庫,。該方法經(jīng)輕微改動后,，可用于從不同的熱帶和亞熱帶樹種中快速提取DNA。
這種方法可以更安全,、更快速地從困難樣品中提取DNA和RNA,，從而為將來在熱帶樹木上的研究提供了便利。
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