上海雨晨生物技術有限公司為您提供：“6T-CEM 人T細胞白血病細胞"；本公司長期代理ATCC,，Sciencell,，ICLC等國內外細胞株，原代細胞,。了解更多信息請咨詢在線客服或銷售人員：
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M：（葉）
產(chǎn)品名稱：6T-CEM 人T細胞白血病細胞
規(guī)格：70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細胞一瓶
特點：細胞代數(shù)為4-5代左右
包裝：內層無菌自封袋,；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋,；說明書
細胞來源：ATCC,、sciencell、ICLC
貨期：7-10個工作日（復蘇觀察期）
運輸方式：聯(lián)邦快遞
供應商：上海雨晨生物技術有限公司
售后服務：
收到細胞后7天,，如發(fā)現(xiàn)細胞有質量問題（如污染,，死亡，快遞運輸?shù)仍颍r,，應出具書面質量問題報告并及時傳真或致銷售人員,，我們將盡快為您解決。
使用說明：
收到細胞后應如何去正確的處理：
您需要準備好細胞所要用到的培養(yǎng)基和相關試劑,，雖然所有的貼壁,，半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多，但是不同的實驗室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,，也會導致對細胞處理不當,，或者環(huán)境的不適應而造成細胞的死亡。
1.收到細胞,，*時間要鏡檢：觀察細胞形態(tài)是否正常,，對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好，觀察細胞密度,，有疑議及時咨提供細胞的技術人員,。由于運輸?shù)臅r間或者溫度的變化，很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣,，主要是貼壁牢固問題,。比如293T,，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面,，會發(fā)生大片的脫落,，細胞聚集在一起，但是細胞生長還是正常的,，通過離心收集,，加以胰酶的消化，重新打散,，又可以正常的貼壁生長,。
2.當通過上一步的觀察，細胞初步?jīng)]有任何問題時,，進行下一步操作,。當收到的細胞密達到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基,，置于培養(yǎng)箱中,，隨后每天觀察。細胞在低于正常生長溫度情況下,，會調整為靜止期,，或者慢速生長期，必須恢復37度的環(huán)境至少3個小時左右,，才能重新調整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài),，在對數(shù)生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細胞的存活率,。
3.如果經(jīng)*步觀察發(fā)現(xiàn)細胞密度超過90%,，并且細胞狀態(tài)很好時，則復溫后2個小時需要立即傳代,。傳代的比例應依據(jù)不同的細胞而定,。對于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定,，不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶,；對于生長較慢，細胞比較薄,，狀態(tài)容易波動的細胞類型,，一次少傳些，保證每瓶細胞密度大些,，便于穩(wěn)定生長,。至于一些比較陌生的細胞,，*次處理也可以依照第二種情況。
傳代操作：
1.吸除培養(yǎng)瓶內舊培養(yǎng)液,。
2.加入無菌pbs洗液（5-8mL）輕輕潤濕細胞,，稀釋多余的培養(yǎng)基，之后吸走洗液,，動作要輕,，不可吹打到細胞。
3.向瓶內加入含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少許,，以能覆滿瓶底為限,。
4.置溫箱中2~5分鐘，一旦鏡檢發(fā)現(xiàn)細胞質回縮,，細胞間隙增大后,，細胞變圓，比較松動后,，立即終止消化,。
5.加入該細胞對應的培養(yǎng)基6mL（T25培養(yǎng)瓶）或12mL（T75培養(yǎng)瓶）終止消化。
6.用吸管通過吸取的培養(yǎng)基輕輕反復吹打瓶壁細胞,，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液,。吹打時應盡量以zui少的次數(shù)將細胞從壁上吹下，不僅要控制吹打的力度,、次數(shù),，還要注意要將細胞盡可能吹成單個。這樣既能減少死細胞,，又能便于細胞再次均勻貼壁生長,。
7.依據(jù)傳代比例，將細胞懸液分瓶,，再補充培養(yǎng)基后,，靜置于溫箱培養(yǎng)，直止貼壁,。
貼壁細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,，繼續(xù)生長的空間不足，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多,，同時代謝廢物也有較多堆積,，需要分瓶培養(yǎng)，對細胞進行傳代擴增,。對于貼壁不太緊的細胞如293,，可以直接吹散后分瓶。而對于貼壁較緊的細胞如CHO，則需要以胰酶消化后再吹散分瓶,。以筆者的經(jīng)驗,，以輕吹或加培養(yǎng)液后輕搖可下較好，但對于經(jīng)驗不太充分的實驗者而言是較難判斷掌握的,。
胰酶消化的程度是一個關鍵：消化過度則對細胞的活性影響較大,，并有部分細胞漂浮，隨棄去的胰酶流失;消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下,，反復吹打同樣也會損傷細胞活性,。影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件,、凍存或4℃保存時間長短,、是否反復凍融、解凍后存放時間及溫度等）,、消化時的溫度（氣溫,、細胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等。含有EDTA的胰酶會比不含的消化能力強很多,，不同細胞對消化液的敏感性也不同,，比如HEP-G2人肝癌細胞，該細胞消化時間可長達10分鐘左右,。 消化時間仔細去摸索一下,，每過2分鐘鏡下觀察細胞是否變圓，記錄*消化時間,，下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。
對于懸浮細胞換液時只需要補液就行,。
懸浮細胞的傳代則不需要用胰酶消化,，直接通過計數(shù)算好傳代的比例，直接分瓶,，補液,。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良好,，當補液時,，避免吹打。典型實例：jurkat就是成團生長,。當jurkat細胞密度比較大時,，可將培養(yǎng)瓶豎直放置2分鐘左右，待大部分細胞沉下,，吸走上層清液,，補充等量的新鮮培養(yǎng)基。而HL-60就不一樣了,，為懸浮單個生長,，如果發(fā)現(xiàn)該細胞包團,，說明細胞狀態(tài)不好，不加以正確的處理,，zui終會發(fā)生凋亡,。
