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ELISA結果判定常用的幾種方法

    1)目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,；與陰性對照的顏色接近者,，判定為陰性。

    2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD,，作為陽性結果的閾值,。

    3)以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性；P／N值小于2．1,，但大于1．5為可疑,；P／N小于1．5為陰性。

4)定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量,。

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心。

2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行,。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。