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ELISA試劑盒的包被條件與封閉

　包被用抗原或抗體的濃度,，包被的溫度和時間，包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗的特點和材料的性質(zhì)而選定,?？贵w和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的,。通常在ELISA板孔中加入包被液后,，在4-8℃冰箱中放置過夜，37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果,。包被的較適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,，每批材料需通過實驗與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml,。

    封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程,。抗原或抗體包被時所用的濃度較低,，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,，封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。封閉的手續(xù)與包被相類似,。較常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的,。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑，其da的特點是價廉,，可以高濃度使用（5%）,。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用，但由于奶粉的成份復(fù)雜,，而且封閉后的載體不易長期保存,，因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用。

封閉是否必要,，取決于ELISA的模式及具體的實驗條件,。并非所有的ELISA固相均需封閉，封閉不當(dāng)反而會使陰性本底增高,。一般說來,，雙抗體夾心法,，只要酶標記物是高活性的，操作時洗滌*,，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果,。特別是用單抗腹水直接包被時，因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面,，業(yè)已起到了類似封閉劑的作用,。但在間接法測定中，封閉一般是不可少的（見2.2.2）,。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中,，在低溫可保存數(shù)月。