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人17-酮類固醇 ELISA試劑盒

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產(chǎn)品型號17-KS試劑盒

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更新時間:2019-07-08 18:34:38瀏覽次數(shù):134次

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ELISA試劑盒的包被條件與封閉

 包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時間,,包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定,。抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的,。通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8冰箱中放置過夜,,37中保溫2小時被認(rèn)為具有同等的包被效果,。包被的較適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,每批材料需通過實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定,。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml,。

    封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程??乖蚩贵w包被時所用的濃度較低,,吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,,從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。封閉的手續(xù)與包被相類似,。較常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,,也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,,其da的特點(diǎn)是價廉,,可以高濃度使用(5%)。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用,,但由于奶粉的成份復(fù)雜,,而且封閉后的載體不易長期保存,因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用,。

封閉是否必要,,取決于ELISA的模式及具體的實(shí)驗(yàn)條件。并非所有的ELISA固相均需封閉,,封閉不當(dāng)反而會使陰性本底增高,。一般說來,雙抗體夾心法,,只要酶標(biāo)記物是高活性的,,操作時洗滌*,,不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。特別是用單抗腹水直接包被時,,因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面,,業(yè)已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測定中,,封閉一般是不可少的(見2.2.2),。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中,在低溫可保存數(shù)月,。 

 

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