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洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,，但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,，而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來,。可以說在ELISA操作中,，洗滌是主要的關(guān)鍵技術(shù),，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,，不得馬虎,。
　　洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,，過程如下：
　?。?/span>1）浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；b.用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后,，即甩去）,；c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔,，放置1-2分鐘,，間歇搖動，浸泡時間不可隨意縮短,；d.吸干孔內(nèi)液體,。吸干應(yīng)*，可用水泵或真空泵抽吸,，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干,；e.重復(fù)操作c和d，洗滌3-4次（或按說明規(guī)定）,。在間接法中如本底較高,，可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。
　　微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液,。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團,，其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合,，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用,，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,，其濃度可在0.05%-0.2%之間,，高于0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度,。
　　（2）流水沖洗式 流水沖洗法初用于小珠載體的洗滌,，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水,。洗滌時附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,，持續(xù)沖洗2分鐘后,，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘,，吸干即可,。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴,，其洗滌效果更為*,，且也簡便、快速,。已有實驗表明,，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓,，讓水流沖擊板孔表面,，洗滌效果更佳。

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