貨號：WTA3682,，產(chǎn)品名稱：人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒網(wǎng)站,，英文名稱：Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-ⅠELISA KIT，品牌：進口原裝/國產(chǎn)

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    ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點得到了廣泛的應(yīng)用,，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,，如不注意,，有可能導(dǎo)致顯色不全,、花板等結(jié)果。在操作過程中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,，以期給實驗師帶來一些啟發(fā),，提高試驗質(zhì)量。
    下面分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,，并給出相應(yīng)的解決辦法

    1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘,。

    2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣,； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時),； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外,。解決辦法： 1） 標(biāo)本為血清：zui好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘,；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后,，3000rpm離心15分鐘,；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中,，若要貯存,，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時放入孵箱,。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干,。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣，zui好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。 5) 標(biāo)本較多時,，請分批操作。

    3 孵育 可能原因： 1) 孵育時未貼封片或加蓋,，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),，吸附于孔壁,，難于清洗*； 2) 孵育時間人為延長,，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,，難以清洗*。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋,； 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間,。

    4 洗板 可能原因： 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時,，洗液量不足,，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞,，抽吸不*,；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差,。 3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長,。 解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通,，洗完板后zui好在吸水紙（選擇干凈,、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排,，或多用幾臺洗板機,。

    5 顯色 可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流,。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制,，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用,； 2) 加樣時保持顯色劑不外流,； 3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械,。

    6 終止 可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡,。

    7 讀板 如讀板時板底不清潔等,。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化,，有效提高檢測質(zhì)量,。在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外,，必須嚴格按照操作步驟進行操作,，同時作好室內(nèi)質(zhì)控,、室間質(zhì)評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,，才能保證檢測質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測,、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用,。

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