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ELISA實驗注意事項
　　1.　正式試驗時,，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性,。有時本底較高,，說明有非特異性反應，可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉,。
　　2.　在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的,，其中包括:
　　(1)　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體,，如聚氯乙烯、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板、試管,、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被,，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
　　（2) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時,。蛋白質包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度(0.1,、1.0和10μg／ml等)進行包被后，在其它試驗條件相同時,，觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值zui大而蛋白量少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1～10μg／ml。
　　(3)　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
　　(4)　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉,、安全,、有明顯地顯色反應，而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,，應注意防護。有條件者應使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,，應加入強酸或強堿以終止反應,。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,，尤其是H2O2在臨用前加入。