貨號(hào)：WTA4226,，產(chǎn)品名稱：人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒,，英文名稱：Human neutrophil elastase,NE ELISA Kit，規(guī)格：48T/96T

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    ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高,、特異性較好的特點(diǎn)得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測效果影響較大,，如不注意,，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果,。在操作過程中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,，以期給實(shí)驗(yàn)師帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量,。
    下面分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因,，并給出相應(yīng)的解決辦法

    1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘,。

    2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 2）手工操作中,，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)),； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決辦法： 1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后,，再用3000rmp離心15分鐘,；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,，放置一段時(shí)間后,，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測,，可放在2-8℃冰箱中,，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi),。 2) 加樣后及時(shí)放入孵箱,。 3) 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干,。 4) 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。 5) 標(biāo)本較多時(shí),，請(qǐng)分批操作。

    3 孵育 可能原因： 1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),，吸附于孔壁，難于清洗*,； 2) 孵育時(shí)間人為延長,，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*,。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋,； 2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。

    4 洗板 可能原因： 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉,。 2) 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*,；洗板針堵塞,，抽吸不*；洗板不暢,，導(dǎo)致洗板效果差,。 3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔,，洗板針暢通,，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干,； 2) 合理安排,，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。

    5 顯色 可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑,； 2) 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流,。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑,，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用,； 2) 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 3) A,、B液應(yīng)避免接觸金屬器械,。

    6 終止 可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡,。

    7 讀板 如讀板時(shí)板底不清潔等,。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,，有效提高檢測質(zhì)量,。在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外,，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng),，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本,，才能保證檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀,，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用,。

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