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當前位置:上海蔚霆商貿(mào)有限公司>>ELISA試劑盒>>人類ELISA試劑盒>> elisa試劑盒步驟人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒原理

人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒原理

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更新時間:2018-09-10 17:50:09瀏覽次數(shù):347次

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ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法
    1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,;與陰性對照的顏色接近者,,判定為陰性。
    2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,,作為陽性結(jié)果的閾值,。
    3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,,但大于1.5為可疑,;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量,。
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心,。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心,。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

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