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當前位置:上海蔚霆商貿(mào)有限公司>>ELISA試劑盒>>人類ELISA試劑盒>> elisa試劑盒步驟人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒原理說明書

人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒原理說明書

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更新時間:2018-09-10 16:55:55瀏覽次數(shù):259次

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ELISA結(jié)果判定常用的幾種方法
    1)目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,,判定為陰性,。
    2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值,。
    3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,;P/N小于1.5為陰性,。
4)定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應再次離心,。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應該再次離心,。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融,,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

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