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人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒

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更新時間:2018-09-07 22:43:37瀏覽次數:250次

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人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒實驗注意事項
1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性,。有時本底較高,,說明有非特異性反應,可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉,。
2. 在人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒中,,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應,,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好,。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時,。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,,在其它試驗條件相同時,,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度,。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml,。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度,。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全,、有明顯地顯色反應,,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,,應注意防護,。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,,以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入,。

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