貨號(hào)：WTA3682,，產(chǎn)品名稱：人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒，英文名稱：Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-ⅠELISA KIT,，規(guī)格：48T/96T

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人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ ELISA試劑盒原理實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1. 正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,，待檢樣品應(yīng)作一式二份,，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,，說明有非特異性反應(yīng),，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。
2. 在人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒中,，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:
(1) 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí),。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg／ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),，觀察陽性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml,。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度,。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉,、安全、有明顯地顯色反應(yīng),，而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù),。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時(shí)間后,，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入,。