人細(xì)胞角蛋白17(CK17)ELISA
人細(xì)胞角蛋白17(CK17)ELISA 是一種用于檢測人體樣本中細(xì)胞角蛋白 17 含量的酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù),，在醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中具有重要意義。
細(xì)胞角蛋白 17 屬于中間絲蛋白家族,，主要在復(fù)層上皮及一些惡性腫瘤細(xì)胞中表達(dá),。通過檢測其含量，可輔助疾病的診斷與病情評估,。人 CK17 ELISA 試劑盒一般采用雙抗體夾心法原理。試劑盒中包含已包被抗人 CK17 抗體的微孔板,，當(dāng)加入待測樣本（如血清,、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清等）時，樣本中的 CK17 會與固相抗體特異性結(jié)合,。之后加入酶標(biāo)抗人 CK17 抗體,，它會與已結(jié)合在固相抗體上的 CK17 結(jié)合，形成 “固相抗體 - CK17 - 酶標(biāo)抗體" 免疫復(fù)合物,。經(jīng)過徹di洗滌,，去除未結(jié)合的物質(zhì)，此時加入酶底物顯色劑,。在酶的催化作用下,，底物發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色的深淺與樣本中 CK17 的含量成正比,。最后,，使用酶標(biāo)儀在特定波長（通常為 450nm）下測定吸光度（OD 值），通過與預(yù)先繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,，就能準(zhǔn)確計算出樣本中 CK17 的濃度,。
以常見的試劑盒操作為例，首先需準(zhǔn)備好樣本,，按照規(guī)定進(jìn)行采集與預(yù)處理,，保證樣本的質(zhì)量。同時,，將試劑盒從冷藏環(huán)境取出,，平衡至室溫。在微孔板中準(zhǔn)確加入標(biāo)準(zhǔn)品,，設(shè)置不同濃度梯度,，如 0、10,、20,、40、80,、160 pg/mL 等,，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。接著，將處理好的待測樣本加入對應(yīng)的孔中,。加入樣本后,，輕輕振蕩混勻，用封板膜封板,，置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育一段時間,，常見為 30 分鐘。孵育結(jié)束后,，棄去孔內(nèi)液體,，用洗滌緩沖液洗滌微孔板數(shù)次，每次浸泡一定時間（如 30 秒）,，確保徹di去除未結(jié)合物質(zhì),，然后拍干。隨后加入酶標(biāo)工作液,，再次孵育并洗滌,。之后依次加入顯色劑 A 和顯色劑 B，輕輕振蕩混勻,，在 37℃避光環(huán)境下顯色,，顯色時間一般為 15 分鐘左右。當(dāng)顯色達(dá)到預(yù)期效果后,，加入終止液終止反應(yīng),，此時溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。在加入終止液后的 15 分鐘內(nèi),，使用酶標(biāo)儀測定各孔的 OD 值,。
人 CK17 ELISA 檢測具有靈敏度高、特異性強(qiáng),、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),，能夠準(zhǔn)確檢測出低含量的 CK17，為疾病的早期診斷提供依據(jù),。在臨床應(yīng)用方面,，可用于某些上皮源性腫瘤（如乳腺癌、肺癌等）的輔助診斷,、病情監(jiān)測以及預(yù)后評估,，幫助醫(yī)生更好地制定治療方案和判斷患者的康復(fù)情況。
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