小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子試劑盒：精準檢測的得力工具
小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子試劑盒，在科研與醫(yī)學研究領域發(fā)揮著關鍵作用,，為深入探究相關生理病理機制提供有力支持。該試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,，能夠精準測定標本中小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子（PARC/CCL18）的水平,。
試劑盒的核心原理基于抗原抗體的特異性結(jié)合。首先,，將純化的小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子（PARC/CCL18）抗體包被于微孔板,，制成固相抗體。當往包被單抗的微孔中依次加入標本,、標準品以及 HRP 標記的檢測抗體后,，若標本中存在肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子（PARC/CCL18），其會先與固相抗體結(jié)合,，進而再與 HRP 標記的抗體結(jié)合,，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物。經(jīng)過徹di洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后,，加入底物 TMB,。在 HRP 酶的催化下，TMB 轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色,。顏色的深淺與樣品中的肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子（PARC/CCL18）含量呈正相關，通過酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，再依據(jù)標準曲線即可精確計算出樣品中小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子（PARC/CCL18）的濃度,。
在樣本處理方面,，該試劑盒具有廣泛的適用性。血清樣本,，需將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4℃過夜,，隨后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清備用,，上清也可置于 - 20℃或 - 80℃保存,，但要避免反復凍融,；血漿樣本,，以 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2 - 8℃,、1000×g 離心 15 分鐘,，取上清用于檢測，同樣需注意避免反復凍融,；組織勻漿樣本,，先用預冷的 PBS (0.01M, pH = 7.4) 沖洗組織以去除殘留血液，稱重后剪碎,，按 1:9 的重量體積比（如 1g 組織對應 9mL PBS,，可根據(jù)實驗需求適當調(diào)整）加入含蛋白酶抑制劑的 PBS 于玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨,，還可通過超聲破碎或反復凍融進一步裂解細胞,，最后 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清檢測,；細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本,，則直接 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測,，也可低溫保存并避免反復凍融,。
操作該試劑盒時，從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條密封放回 4℃,。除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。之后棄去液體,，在吸水紙上拍干,，每孔加滿 350μL 洗滌液，靜置 1min 后甩去洗滌液并拍干,，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）,。接著每孔加入底物 A,、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min,，再加入 50μL 終止液,，15min 內(nèi)于 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子（PARC/CCL18）在免疫反應中扮演重要角色,，能吸引淋巴細胞參與 B 細胞遷移到 B 細胞濾泡淋巴結(jié),，對初始 T 淋巴細胞、CD4 + 和 CD8 + T 細胞也具有趨化活性,。該試劑盒憑借其高靈敏度,、特異性強、操作相對簡便,、檢測快速以及結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)勢,，可用于定量檢測體液中抗原成分，在生化領域應用廣泛,，助力科研人員深入開展相關研究,，推動相關領域的知識拓展與技術進步。
13
化工儀器網(wǎng)