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供貨周期 | 一個月 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
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SWANT Quidel
上海乾思生物SWANT Quidel品牌代理專業(yè)經(jīng)營進口胎牛血清,、細胞因子、ELISA試劑盒,、細胞,、抗體、生物試劑,、耗材,、培養(yǎng)基、一抗、二抗,、其產(chǎn)品吸附均勻,,吸附性好,空白值低,,孔底透明度高,代做ELISA實驗等,。完善的庫存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的純化技術(shù),,保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。
怎樣查到一個特定細胞株的相關(guān)知識和培養(yǎng)條件,?
ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數(shù)細胞的詳細資料,。打開ATCC網(wǎng)頁的Cells and hybridomas鏈接,輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數(shù)據(jù)庫,。數(shù)據(jù)庫中有每一種細胞的詳細描述,,包括細胞的來源,培養(yǎng)和凍存條件,,以及相關(guān)文獻等資料,。
如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?
培養(yǎng)某類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件,。MEM中培養(yǎng)的細胞,,很可能在DMEM或M199中同樣容易生長??傊?,*MEM、DMEM做貼壁細胞培養(yǎng),;RPMI1640做懸浮細胞培養(yǎng),;各種目的無血清培養(yǎng)*AIMV培養(yǎng)基(SFM)。
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;"/>1 收集樣品
2 相關(guān)試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆轉(zhuǎn)錄酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預(yù)混試劑),。
3 實驗儀器 熒光定量PCR儀; PCR儀;低溫離心機,。
4 總RNA提取
5 cDNA合成 在0.5ml的離心管中加入1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系?;靹蚝?0℃變性RNA 5分鐘,,冰上速冷1分鐘,離心將溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系,。PCR儀中反應(yīng)條件設(shè)置 37℃延伸60min,,70℃保溫15min終止反應(yīng)。合成好的cDNA置于 -20 ℃保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;"/>6 引物設(shè)計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實時定量PCR 按以下反應(yīng)體系進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase,、SYBR Green I,、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2,、dNTP mix including dUTP)25ul;上游引物F 1 ul,,下游引物R 1 ul;cDNA template 2ul,。定量PCR儀擴增反應(yīng)條件設(shè)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環(huán))。
8 PCR產(chǎn)物溶解曲線分析 將所擴增的PCR 產(chǎn)物進行溶解曲線分析,,單峰溶解曲線表示擴增產(chǎn)物單一,,無非特異性擴增產(chǎn)物。溶解曲線生成的反應(yīng)程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s,。