NK-92MI細(xì)胞系
NK-92MI細(xì)胞系源于一位非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷（NK）細(xì)胞,，經(jīng)永生化處理后,，成為腫瘤免疫研究領(lǐng)域的明星細(xì)胞模型。在顯微鏡下,，NK-92MI 細(xì)胞呈圓形或橢圓形,，以懸浮狀態(tài)生長,，細(xì)胞大小均一,，表面可見豐富的微絨毛，這些結(jié)構(gòu)極大地增加了細(xì)胞的表面積,，有助于與靶細(xì)胞更高效地接觸,。細(xì)胞胞質(zhì)豐富，經(jīng)染色后呈弱嗜堿性,，內(nèi)部細(xì)胞器中,，線粒體呈短棒狀，為細(xì)胞高強(qiáng)度的殺傷活動(dòng)提供充足能量,；溶酶體數(shù)量眾多且體積較大,，內(nèi)含穿孔素,、顆粒酶等多種細(xì)胞毒性物質(zhì)；高爾基體發(fā)達(dá),，參與合成和運(yùn)輸殺傷相關(guān)蛋白,；細(xì)胞核大而圓，占據(jù)細(xì)胞大部分體積,，染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀,，核仁明顯，顯示出細(xì)胞活躍的代謝和增殖狀態(tài),。
NK-92MI 細(xì)胞系的生物學(xué)特性圍繞其強(qiáng)大的天然殺傷功能展開,。細(xì)胞表面表達(dá)多種活化性受體，如 NKp30,、NKp44,、NKp46 和 NKG2D 等，這些受體能夠識(shí)別靶細(xì)胞表面異常表達(dá)或上調(diào)的配體,，如 MICA/B,、ULBP 家族蛋白等，一旦結(jié)合,，便觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,，激活磷脂酶 C-γ（PLC-γ），進(jìn)而促使細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高,，激活下游的蛋白激酶和轉(zhuǎn)錄因子,，最終誘導(dǎo)溶酶體與細(xì)胞膜融合，釋放穿孔素和顆粒酶,，穿孔素在靶細(xì)胞膜上形成跨膜孔道,，使顆粒酶能夠進(jìn)入靶細(xì)胞，激活半胱天冬酶級(jí)聯(lián)反應(yīng),，導(dǎo)致靶細(xì)胞凋亡,。此外，NK-92MI 細(xì)胞還能通過分泌腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）和干擾素 -γ（IFN-γ）等細(xì)胞因子,，一方面直接誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡,，另一方面調(diào)節(jié)機(jī)體免疫微環(huán)境，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用,。值得注意的是,，NK-92MI 細(xì)胞缺乏抑制性受體的功能性表達(dá)，這使其能夠持續(xù)保持殺傷活性,，不受正常細(xì)胞表面主要組織相容性復(fù)合體 I 類（MHC I）分子的抑制,，成為理想的腫瘤殺傷細(xì)胞工具。
培養(yǎng) NK-92MI 細(xì)胞系需要特定的條件和嚴(yán)格的操作規(guī)范,?；A(chǔ)培養(yǎng)基通常選用含 12.5% 胎牛血清和 12.5% 馬血清的 α-MEM 培養(yǎng)基,，兩種血清的搭配為細(xì)胞提供更豐富的營養(yǎng)成分和生長因子；同時(shí)添加 0.2 mM 肌醇,、0.02 mM ye酸,、1 mM 丙酮酸鈉等補(bǔ)充劑，以及 1000 U/mL 的重組人bai細(xì)胞介素 - 2（rhIL-2）,，rhIL-2 是維持 NK-92MI 細(xì)胞存活,、增殖和殺傷活性的關(guān)鍵細(xì)胞因子。將細(xì)胞置于 37℃,、5% 二氧化碳的恒溫培養(yǎng)箱中,，模擬人體生理環(huán)境，維持細(xì)胞內(nèi)酸堿平衡與酶活性,。由于細(xì)胞呈懸浮生長,，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 0.2 - 1×10?個(gè) /mL 時(shí)，需及時(shí)進(jìn)行傳代,，傳代時(shí)采用離心（1000 rpm,，5 分鐘）去除舊培養(yǎng)液，用新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，傳代比例根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)控制在 1:2 - 1:5 ,。凍存時(shí)，采用 90% 胎牛血清與 10% 二甲基亞砜混合凍存液,，遵循程序降溫原則,，先在 - 80℃冰箱過夜，再轉(zhuǎn)入液氮中長期保存,。在培養(yǎng)過程中,，需定期通過臺(tái)盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞活力，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物如 CD56,、CD16 的表達(dá),，確保細(xì)胞特性穩(wěn)定。
在科研應(yīng)用領(lǐng)域,，NK-92MI 細(xì)胞系發(fā)揮著不可替代的作用,。在腫瘤免yi治療研究中，科研人員利用該細(xì)胞系開發(fā)基于 NK 細(xì)胞的過繼性免疫療法,，通過基因編輯技術(shù)增強(qiáng)其對特定腫瘤抗原的識(shí)別能力,，或與 CAR-T 細(xì)胞療法相結(jié)合，拓展免yi治療的應(yīng)用范圍,；在一項(xiàng)針對多發(fā)性骨髓瘤的研究中，經(jīng)改造的 NK-92MI 細(xì)胞顯著提高了對腫瘤細(xì)胞的殺傷效率,。在藥物研發(fā)方面,，NK-92MI 細(xì)胞是評(píng)估免疫調(diào)節(jié)藥物和抗腫瘤藥物療效的重要模型,，新型的 NK 細(xì)胞激活劑在該細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)中，能夠進(jìn)一步增強(qiáng)其殺傷活性,；同時(shí),，也用于研究藥物對 NK 細(xì)胞功能的影響，為腫瘤聯(lián)合治療方案的設(shè)計(jì)提供依據(jù),。此外,，NK-92MI 細(xì)胞還用于研究 NK 細(xì)胞的發(fā)育、分化和功能調(diào)控機(jī)制,，為理解機(jī)體天然免疫防御系統(tǒng)提供理論支持,。
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