CGM1人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細胞系
CGM1人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細胞系,,源自人類 B 淋巴細胞經(jīng) Epstein-Barr(EB)病毒感染后成功轉(zhuǎn)化的特殊細胞群體,,是研究病毒與宿主細胞相互作用,、B 細胞生物學(xué)及相關(guān)疾病機制的重要工具,。在顯微鏡下,,CGM1 細胞呈典型的淋巴細胞形態(tài),多為圓形或類圓形,,以懸浮狀態(tài)生長于培養(yǎng)液中,,細胞大小均一,表面光滑,,偶爾可見細胞伸出短小的偽足,。與普通 B 細胞相比,經(jīng) EB 病毒轉(zhuǎn)化后的 CGM1 細胞,,胞質(zhì)比例相對增加,,經(jīng)染色后呈弱嗜堿性,內(nèi)部細胞器以線粒體,、核糖體等基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)為主,,線粒體為細胞代謝提供能量,核糖體參與合成病毒蛋白與細胞自身蛋白,;細胞核大而圓,,占據(jù)細胞大部分體積,染色質(zhì)呈細顆粒狀,核仁明顯,,展現(xiàn)出活躍的增殖狀態(tài),。
CGM1 細胞的生物學(xué)特性深受 EB 病毒感染的影響。在細胞增殖方面,,EB 病毒編碼的潛伏膜蛋白 1(LMP1)和 EB 核抗原 2(EBNA2)是關(guān)鍵調(diào)控因子,。LMP1 可模擬腫瘤壞死因子受體超家族成員的信號,激活 NF-κB,、PI3K/AKT 等信號通路,,抑制細胞凋亡并促進細胞增殖;EBNA2 則通過與宿主細胞轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,,調(diào)控細胞周期相關(guān)基因的表達,,驅(qū)動細胞進入增殖周期,在適宜培養(yǎng)條件下,,CGM1 細胞的倍增時間約為 24 - 36 小時,。免疫特性上,CGM1 細胞保留了 B 細胞的部分免疫功能,,能夠表達主要組織相容性復(fù)合體 II 類分子(MHC II)和 B 細胞受體(BCR),,具備抗原呈遞和識別能力。但由于 EB 病毒的轉(zhuǎn)化,,細胞表面還特異性表達 LMP1,、LMP2 等病毒抗原,這些抗原可作為免yi治療的靶點,,同時也使細胞易被機體免疫系統(tǒng)識別,。此外,CGM1 細胞對 EB 病毒存在依賴性,,若病毒感染狀態(tài)被打破,,細胞的增殖和存活會受到影響,這種特性為研究病毒持續(xù)性感染機制提供了便利,。
培養(yǎng) CGM1 人 EB 病毒轉(zhuǎn)化的 B 細胞系需要特定的培養(yǎng)條件和操作規(guī)范?;A(chǔ)培養(yǎng)基通常選用含 10% - 15% 優(yōu)質(zhì)胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基,,胎牛血清中豐富的生長因子、氨基酸和激素,,能夠滿足細胞生長和代謝需求,;添加 1% 的青mei素 - 鏈mei素雙抗溶液,防止細菌污染,。將細胞置于 37℃,、5% 二氧化碳的恒溫培養(yǎng)箱中,模擬人體生理環(huán)境,維持細胞內(nèi)酸堿平衡與酶活性,。由于 CGM1 細胞呈懸浮生長,,當(dāng)細胞密度達到 1×10? - 2×10?個 /mL 時,需及時進行傳代,,傳代時采用離心(1000rpm,,5 分鐘)去除舊培養(yǎng)液,用新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)基重懸細胞,,傳代比例根據(jù)細胞狀態(tài)控制在 1:3 - 1:5 ,。凍存時,采用 90% 胎牛血清與 10% 二甲基亞砜混合凍存液,,遵循程序降溫原則,,先在 - 80℃冰箱過夜,再轉(zhuǎn)入液氮中長期保存,。在培養(yǎng)過程中,,需定期通過臺盼藍染色檢測細胞活力,利用流式細胞術(shù)檢測細胞表面標志物如 CD19,、CD20,、LMP1 的表達,確保細胞特性穩(wěn)定,。
在科研應(yīng)用領(lǐng)域,,CGM1 細胞系發(fā)揮著不可替代的作用。在病毒學(xué)研究中,,科研人員借助該細胞系深入探究 EB 病毒的潛伏感染,、裂解周期轉(zhuǎn)換機制,發(fā)現(xiàn) microRNA 可調(diào)控 EB 病毒基因表達,,影響病毒與宿主細胞的相互作用,。在免疫學(xué)研究方面,CGM1 細胞用于研究 B 細胞活化,、增殖和分化的分子機制,,以及機體對 EB 病毒感染的免疫應(yīng)答過程。在疾病研究中,,由于 EB 病毒與多種疾病相關(guān),,如 Burkitt 淋巴瘤、鼻咽癌等,,CGM1 細胞可用于模擬病毒感染引發(fā)的細胞惡性轉(zhuǎn)化過程,,幫助揭示疾病發(fā)病機制。在藥物研發(fā)領(lǐng)域,,CGM1 細胞是篩選抗 EB 病du藥物和免疫調(diào)節(jié)藥物的重要模型,,新型的 EB 病毒蛋白酶抑制劑在該細胞系實驗中,,能夠有效抑制病毒復(fù)制;針對細胞表面病毒抗原設(shè)計的 CAR-T 細胞療法,,在 CGM1 細胞模型上展現(xiàn)出良好的抗腫瘤效果,,為相關(guān)疾病的治療提供了新方向。
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