DiFi人結(jié)直腸癌細(xì)胞系
DiFi人結(jié)直腸癌細(xì)胞系源自人體結(jié)直腸癌組織,，是研究結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制,、開發(fā)新型治療手段的重要模型,。在顯微鏡下,，DiFi 細(xì)胞呈現(xiàn)典型的上皮樣癌細(xì)胞形態(tài)，多為多邊形或不規(guī)則形,，細(xì)胞邊界清晰,，但由于旺盛的增殖能力，常相互堆疊形成復(fù)層結(jié)構(gòu),，局部可見類似腺腔樣的結(jié)構(gòu),，模擬了結(jié)直腸癌在體內(nèi)的組織學(xué)特征。細(xì)胞胞質(zhì)豐富,，經(jīng)染色后呈弱嗜酸性,，內(nèi)部含有大量線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器,，為細(xì)胞的快速生長(zhǎng),、代謝及侵襲轉(zhuǎn)移提供充足能量和物質(zhì)基礎(chǔ),；細(xì)胞核大且深染，核質(zhì)比例失調(diào),，核仁明顯且數(shù)目增多,，部分細(xì)胞可見多核及異常核分裂象，直觀體現(xiàn)出其惡性腫瘤細(xì)胞的本質(zhì),。
DiFi 細(xì)胞具有顯著的生物學(xué)特性,，使其成為結(jié)直腸癌研究的理想對(duì)象。在增殖能力方面,，細(xì)胞周期調(diào)控基因異常表達(dá),，Cyclin D1、CDK4 等蛋白的高表達(dá)促使細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶持續(xù)活化,，推動(dòng)細(xì)胞從 G1 期快速進(jìn)入 S 期,，在適宜培養(yǎng)條件下，其倍增時(shí)間約為 36 - 48 小時(shí) ,。侵襲與轉(zhuǎn)移能力上,，DiFi 細(xì)胞大量分泌基質(zhì)金屬蛋白酶 MMP-2 和 MMP-9，這些蛋白酶如同 “分子剪刀",，可高效降解結(jié)直腸組織細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白,、層粘連蛋白等成分，破壞基底膜完整性,，為癌細(xì)胞突破上皮屏障創(chuàng)造條件,；細(xì)胞表面整合素家族蛋白如 αvβ3、α5β1 表達(dá)上調(diào),，增強(qiáng)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附與脫離能力,；同時(shí)，上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）在 DiFi 細(xì)胞中頻繁發(fā)生,，E-cadherin 表達(dá)下調(diào),，N-cadherin 和 Vimentin 表達(dá)上調(diào)，賦予細(xì)胞間質(zhì)細(xì)胞特性,，顯著提升其遷移和侵襲能力,。此外，DiFi 細(xì)胞中 Wnt/β-catenin,、PI3K/AKT 等信號(hào)通路持續(xù)激活,，不僅維持癌細(xì)胞的存活與增殖，還參與調(diào)控侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá),，進(jìn)一步加劇腫瘤的惡性進(jìn)展,。值得關(guān)注的是，DiFi 細(xì)胞對(duì)部分hua療藥物存在天然耐藥性，這使其成為研究結(jié)直腸癌耐藥機(jī)制的重要模型,。
培養(yǎng) DiFi 人結(jié)直腸癌細(xì)胞系需遵循嚴(yán)格的操作規(guī)范,。常用含 10% 優(yōu)質(zhì)胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)體系，胎牛血清中豐富的生長(zhǎng)因子,、氨基酸等物質(zhì),，能夠滿足細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝需求；添加 1% 的青mei素 - 鏈mei素雙抗溶液,，預(yù)防細(xì)菌污染,。將細(xì)胞置于 37℃、5% 二氧化碳的恒溫培養(yǎng)箱中,，模擬人體生理環(huán)境,，維持細(xì)胞內(nèi)酸堿平衡與酶活性。當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 80% - 90% 時(shí),，使用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液進(jìn)行消化傳代,，消化過程需在顯微鏡下實(shí)時(shí)觀察，避免過度消化損傷細(xì)胞,，傳代比例一般控制在 1:3 - 1:5 ,。凍存時(shí)，采用 90% 胎牛血清與 10% 二甲基亞砜混合凍存液,，遵循程序降溫原則,，先于 - 80℃冰箱過夜，再轉(zhuǎn)移至液氮中長(zhǎng)期保存,。在培養(yǎng)過程中,，還需定期檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)、基因型穩(wěn)定性,，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
在科研應(yīng)用領(lǐng)域,，DiFi 細(xì)胞系成果豐碩,。在藥物研發(fā)方面，它是篩選抗結(jié)直腸癌藥物的重要模型,，科研人員通過在 DiFi 細(xì)胞上測(cè)試新型靶向 EGFR,、VEGF 的抑制劑、免疫檢查點(diǎn)抑制劑等,，評(píng)估藥物對(duì)癌細(xì)胞增殖,、凋亡、侵襲的影響,，為臨床用藥提供理論依據(jù),。在機(jī)制研究中，借助基因編輯技術(shù),，科學(xué)家深入探究 APC,、KRAS 等基因突變與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián),，以及相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)制，為靶向治療奠定基礎(chǔ),。此外,，DiFi 細(xì)胞系還用于評(píng)估聯(lián)合治療方案的效果，如hua療聯(lián)合靶向治療,、免yi治療聯(lián)合放療等,，助力優(yōu)化結(jié)直腸癌治療策略，推動(dòng)結(jié)直腸癌診療技術(shù)不斷進(jìn)步,。
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