除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解，不需高壓滅菌外,，大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓滅菌15-30分鐘,。尤其是對無菌試驗培養(yǎng)基滅菌不*，直接關(guān)系到試驗結(jié)果,。因此必須認(rèn)真對高壓滅菌器進(jìn)行滅菌效果的驗證,。
1．試驗材料
(1) 嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillus stearothermophilus) ATCC7053是本法常用的生物指示菌,，含芽胞量5-l05CFU/片,。
(2) 121℃壓力蒸氣滅菌化學(xué)指示卡。
(3) 溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓滅菌20分鐘后備用,。
(4) 0-150℃留點(diǎn)溫度計,。
2．方法與結(jié)果
將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中?；瘜W(xué)指示卡和留點(diǎn)溫度計放入敞口試管中,。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份,。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處,。如滅菌器為二層,，則需放10處。
留點(diǎn)溫度計標(biāo)化合格后方可用于驗證試驗,。檢測前,，需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測后留點(diǎn)溫度計的溫差應(yīng)存1℃之間,，則說明滅菌器內(nèi)的溫度分布是均勻的,。
滅菌后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時，觀察顏色變化,。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,，說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未*滅活，細(xì)菌仍可在培養(yǎng)基中生長,，分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色,。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色，則說明芽胞已滅活,。同時要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對照,，不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對照。
化學(xué)指示卡上的指示色塊,，在高壓蒸氣滅菌時,，由淡黃色變?yōu)楹谏ｋS著顏色變化的深淺,，并與對照色相比,，可判斷滅菌效果是否達(dá)到要求?；瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存,。遇潮會變色，影響滅菌效果的觀測,。
高壓蒸氣滅菌必須使蒸氣順利進(jìn)入滅菌器內(nèi),，與滅菌物品接觸，并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到滅菌的效果,。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超過總體積的2/3),。二種驗證各重復(fù)三次，共做六次,。
5個點(diǎn)六次試驗表明溫度均在121℃,，化學(xué)指示卡變黑；程度與對照色一致,；培養(yǎng)基均未改變顏色,，說明高壓蒸氣滅菌效果
合格。
高壓滅菌器屬于強(qiáng)檢儀器,，但強(qiáng)檢只是對儀器物理參數(shù)的考核,。所以做過強(qiáng)檢的滅菌器還必須進(jìn)行滅菌效果的驗證。一些單位常常忽略了這個重要的問題,。國內(nèi)市售的手提滅菌器,，往往儀器指針達(dá)到所需的溫度，但滅菌物品的實際溫度卻未達(dá)到要求,。導(dǎo)致滅菌物品不*,，影響實驗結(jié)果。培養(yǎng)基滅菌不*,，影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷,。因此高壓蒸氣滅菌器無菌效果的驗證是一個必須引起重視的問題。
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