核酸的定量是分光光度計使用頻率zui高的功能,。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,，單鏈,、雙鏈DNA,，以及RNA。核酸的zui高吸收峰的吸收波長260 nm,。每種核酸的分子構(gòu)成不一,，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,，事先要選擇對應(yīng)的系數(shù),。如：1OD 的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA,，40μg/ml的RNA,，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,，從而得出相應(yīng)的樣品濃度,。測試前，選擇正確的程序,，輸入原液和稀釋液的體積,，爾后測試空白液和樣品液。然而,，實驗并非一帆風順,。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實驗者zui頭痛的問題。靈敏度越高的儀器,，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大,。


      事實上，上海分光光度計的設(shè)計原理和工作原理,，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化,，即儀器有一定的準確度和度,。如Eppendorf Biophotometer的準確度≤1.0%（1A）。這樣多次測試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動,，都是正常的,。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,，離子濃度等：在測試時,，離子濃度太高，也會導致讀數(shù)漂移,，因此建議使用pH值一定,、離子濃度較低的緩沖液,，如TE,，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,，尤其是核酸樣品,。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了zui大程度減少顆粒對測試結(jié)果的影響,，要求核酸吸光值至少大于0.1A,，吸光值在0.1-1.。在此范圍內(nèi),，顆粒的干擾相對較小,，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低,，或者過高（超過光度計的測試范圍）,。zui后是操作因素，如混合要充分,，否則吸光值太低,，甚至出現(xiàn)負值；混合液不能存在氣泡,，空白液無懸浮物,，否則讀數(shù)漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,，否則濃度差異太大,；換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致；不能采用窗口磨損的比色杯,；樣品的體積必須達到比色杯要求的zui小體積等多個操作事項,。

      除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,，如A260/A280的比值,，用于評估樣品的純度,，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）,。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響,。A230表示樣品中存在一些污染物,，如碳水化合物，多肽,，苯酚等,，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子,。純樣品,，A320一般是0。