隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展,,病毒載體在目的基因的導入和表達中得到了廣泛應(yīng)用。由于其效率高,、適用細胞種類多,、瞬時表達等特點,,已經(jīng)廣泛應(yīng)用于疫苗研發(fā)領(lǐng)域,,對病毒顆粒數(shù)進行實時的檢測是工藝中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),病毒的定量檢測對于疫苗的指導研發(fā)和質(zhì)量控制具有重要意義,。
目前進行病毒定量的方法主要是實時熒光定量PCR方法(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction , RT-qPCR),,通過熒光定量的方法對模版拷貝數(shù)進行定量, 每個模板的Ct值與該模板起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系,,利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線,,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析,從而反映完整病毒顆粒數(shù),。
實時熒光定量PCR法目前已經(jīng)發(fā)展成為病毒定量檢測使用廣泛的技術(shù)之一,,具有特異性好、靈敏度高,、污染小等優(yōu)勢,。但實時熒光定量PCR法前期體系構(gòu)建樣品制備繁瑣且不穩(wěn)定,極占實驗員時間和精力的同時也影響定量結(jié)果,。
??芕itae 100 全自動化PCR體系構(gòu)建系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)體系構(gòu)建流程自動化,移液準確且穩(wěn)定,實驗結(jié)果滿足需求,,解放雙手的同時保證了樣品檢測結(jié)果的可靠性,。
整體實驗流程
病毒顆粒數(shù)檢測(qPCR)整體實驗流程
應(yīng)用場景
睿科生化為某疫苗公司腺病毒顆粒數(shù)檢測提供自動化體系構(gòu)建方案,,具體方案如下:
實驗流程
疫苗公司腺病毒顆粒數(shù)檢測自動化體系構(gòu)建流程
實驗結(jié)果
標準曲線圖
樣品擴增圖
標準曲線圖,,根據(jù)主要Slope數(shù)值判斷曲線的點稀釋是否準確,結(jié)果顯示,,與客戶手動操作的slope值(Slope=-3.376)一致,,R2=0.999代表曲線偏離,標準曲線配置符合要求,。
樣品擴增圖,,底部ROX所在區(qū)域越集中,即體系分裝越準確,。結(jié)果顯示,,體系構(gòu)建分裝準確,符合要求,。
產(chǎn)品優(yōu)勢
Vitae 100全自動PCR體系構(gòu)建系統(tǒng)
1,、機械臂定位準確到0.05mm,移液精確度CV≤2%,,數(shù)據(jù)穩(wěn)定可靠,;
2、儀器能有效解決疫苗研發(fā)過程中,,樣品檢測和產(chǎn)品放行人工操作不穩(wěn)定的困境,;
3、加樣過程自動化,,體系構(gòu)建全程用時25min,,節(jié)省時間和人力;
4,、配備紫外消毒燈和HEPA過濾裝置,,保證操作安全性。
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