豬肉中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物多殘留量的測定
四環(huán)素類藥物 (TCs),、磺胺類藥物 (SAs)和喹諾酮類藥物 (QNs)是畜牧養(yǎng)殖中常用到的三類藥物,,常用來治療或預(yù)防雞的細(xì)菌,、支原體和球蟲感染,但若使用不當(dāng)會導(dǎo)致其在動物源性食品中的殘留超標(biāo), 影響人類健康, 并且會使細(xì)菌的耐藥性增強(qiáng),。
2022年2月1日,,GB 31658.17-2021《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 動物性食品中四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類多殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》正式實施,,本文參考上述標(biāo)準(zhǔn),,試樣中殘留的四環(huán)素類、磺胺類和喹諾酮類藥物,,用Mcllvaine-Na2EDTA緩沖液提取,,使用HLB柱經(jīng)睿科Fotector Plus全自動固相萃取儀凈化,,洗脫液經(jīng)???EVA 80全自動氮吹儀濃縮,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定,,外標(biāo)法定量,。
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儀器和耗材
● 儀器
Fotector Plus全自動固相萃取儀
EVA 80 高通量全自動平行濃縮儀
Agilent 1290Ⅱ/6470高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀
Fotector Plus
全自動固相萃取儀
EVA 80 高通量
全自動平行濃縮儀
● 耗材
HLB固相萃取柱(RayCure,200 mg/6 mL)
● 試劑
甲醇(優(yōu)級純)
乙腈(優(yōu)級純)
正己烷(優(yōu)級純)
超純水
0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液:取磷酸二氫鈉7.8 g,,用水溶解并稀釋至1000 mL,。
0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液:取磷酸氫二鈉17.9 g,用水溶解并稀釋至1000 mL,。
磷酸鹽緩沖液:取0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液190 mL,,用0.05 mol/L磷酸氫二鈉溶液稀釋至1000 mL。
1 mol/L氫氧化鈉溶液:取氫氧化鈉4 g,,用水溶解并稀釋至100 mL,。
0.03 mol/L氫氧化鈉溶液:取1 mol/L氫氧化鈉溶液3 mL,用水稀釋至100 mL,。
Mcllvaine-Na2EDTA緩沖液:取檸檬酸12.9 g,、磷酸氫二鈉10.9 g、乙二胺四乙酸二鈉39.2 g,,加水900 mL,,用1 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至5.0±0.2,用水稀釋至1000 mL,。
洗脫液:取甲醇150 mL,,加乙酸乙酯150 mL、濃氨水6 mL,,混勻,。
復(fù)溶液:取水40 mL,加甲醇5 mL,、乙腈5 mL,、甲酸0.05 mL,混勻,。
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樣品制備
取試樣1 g(準(zhǔn)確至±0.01 g)于50 mL離心管,,加入Mcllvaine-Na2EDTA緩沖液8 mL,渦旋1 min,超聲20 min,,高速冷凍離心5 min,,收集上清液。下層殘渣中加磷酸鹽緩沖液8 mL,,重復(fù)提取一次,,合并兩次提取液,混勻,,備用,。
● 凈化
將HLB固相萃取柱安裝在Fotector Plus全自動固相萃取儀上,依次用甲醇5 mL,、水5 mL活化,,取備用液過柱,依次用5 mL水和20%甲醇水溶液5 mL淋洗,,吹干,,用洗脫液10 mL洗脫。收集洗脫液于EVA-80全自動平行濃縮儀中45 ℃水浴氮氣吹干,。加入復(fù)溶液1.0 mL,,渦旋1 min溶解殘余物,微孔濾膜過濾,,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定,。
具體的固相萃取方法見圖3。
●固相萃取凈化條件
Fotector Plus固相萃取方法
3
液質(zhì)檢測條件
● 液相條件
● 液相梯度洗脫條件
● 質(zhì)樸儀器參數(shù)
● MRM參數(shù)
● 色譜圖
四環(huán)素類,、磺胺類和喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流圖(20μg/L)
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結(jié)果與討論
為了驗證該方法的回收率,,本實驗在空白豬肉樣品中加入四環(huán)素類、喹諾酮類和磺胺類標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行加標(biāo)回收驗證(n=3),,并采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量,,數(shù)據(jù)結(jié)果如表-2所示。加標(biāo)回收率在62.4%~105.6%之間,,RSD值控制在15%以內(nèi),,滿足標(biāo)準(zhǔn)要求,說明該方法能夠很好地運用于動物性食品中四環(huán)素類,、喹諾酮類和磺胺類多殘留量的檢測,。
表-2.豬肉樣品加標(biāo)回收率及RSD值
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總結(jié)
● 在超聲提取步驟時使用冰水浴來進(jìn)行20 min的超聲,可減少由于長時間超聲引起的溫度升高,,而造成目標(biāo)物的損失,。
● 應(yīng)避免樣品在濃縮過程中長時間氮吹,、過分濃縮干燥,否則可能會造成回收率損失,。
● 本方法使用??艶otector Plus高通量全自動固相萃取儀可實現(xiàn)凈化過程的自動化,從活化到上樣,、洗脫一步到位,;最多一天能夠處理180個樣品,高效便捷地完成固相萃取過程,。同時搭配??艫uto EVA 80高通量全自動平行濃縮儀進(jìn)行濃縮,二者的樣品架可兼容使用,,無需進(jìn)行樣品轉(zhuǎn)移,,操作連貫簡便,避免樣品的損失,。
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