目前,，來源于肉類食品的飲食污染、其他食品或藥物誤服而導(dǎo)致的食源性興奮劑困擾事件層出不窮,，食源性興奮劑的預(yù)防控制也成為各類體育賽事管理機構(gòu)和供應(yīng)服務(wù)基地保障的重要內(nèi)容,。
食源性興奮劑
食源性興奮劑是指來源于食品中的興奮劑，包括一般性食品及保健食品中從生產(chǎn)到加工過程中天然存在或故意添加而殘留的興奮劑成分,，如肉類食品多次被爆出的“瘦肉精”,。“瘦肉精”是一大類藥物的總稱從興奮劑的分類來看，它屬于β-腎上腺素受體激動劑,?？藗愄亓_、沙丁胺醇,、萊克多巴胺是常見的三種在畜牧養(yǎng)殖使用的“瘦肉精”,，同時也是常見的人為服用興奮劑。[1]世界反興奮劑機構(gòu)在其2021年的指導(dǎo)性文件里特別指出,，如果克倫特羅,、萊克多巴胺等四種違禁物質(zhì)的陽性結(jié)果顯示濃度低于5納克/毫升，他們將進行調(diào)查。[2]
興奮劑成分檢測儀器靈敏度及相應(yīng)物質(zhì)的檢測標準的不斷提升,、新技術(shù)的應(yīng)用為反興奮劑管理機制提供了堅強保障,。有關(guān)單位通過開展微生物檢驗、樣品制備管理等,，高質(zhì)量,、高標準、高效率開展食品檢驗檢測工作,，監(jiān)測評估食品安全風(fēng)險,，竭力保障食源性興奮劑“零檢出”，使運動員得以安心訓(xùn)練備戰(zhàn),。[3]
食品中4種瘦肉精類殘留量測定
依據(jù)《GB/T 22286-2008 動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》,，試樣中的β-激動劑經(jīng)過酶解，用高氯酸調(diào)節(jié)pH值,，沉淀蛋白后離心,，上清液用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH后用異丙醇-乙酸乙酯提取，用陽離子交換柱凈化,，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行測定,，內(nèi)標法定量。
儀器和耗材
1 儀器
Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀,；
Auto EVA 60全自動平行濃縮儀；
Agilent 1290II/6470 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜
MCX固相萃取柱（RayCure,，60mg/3mL）
全自動固相萃取儀
全自動氮吹濃縮儀
2 試劑
乙酸乙酯,、異丙醇、甲醇均為色譜純,；甲酸,、高氯酸、氨水,、氫氧化鈉,；β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶。
0.2mol/L乙酸鈉緩沖液：稱取13.6g乙酸鈉,，溶解于500ml水中,，用適量乙酸調(diào)節(jié)pH至5.2。
標準品：萊克多巴胺鹽酸鹽,，克倫特羅鹽酸鹽,，沙丁胺醇，特布他林硫酸鹽,，100ng/ml,。
內(nèi)標物：沙丁胺醇-D3，克倫特羅-D9，10ng/ml,。
樣品制備
1 酶解
準確稱取5g（精確到0.01g）經(jīng)搗碎的樣品于50mL離心管內(nèi),，加入0.2moL/L乙酸鈉溶液（pH=5.2）20mL，再加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶100μL,，漩渦混勻,，于37℃下避光水浴水解12h。
2 提取
添加1ml的內(nèi)標工作液于待測樣品中,，加蓋置于水平振蕩器震蕩15min,，5000r/min高速離心10min，準確取10mL上清液于另一50mL離心管中,，用高氯酸調(diào)節(jié)PH至1.0±0.3,，4000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一50mL離心管中,，用10moL/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至11,，加入4~5g氯化鈉，加入異丙醇：乙酸乙酯=6:4 15mL,，充分提取,，4000r/min離心5min，吸取全部有機相到?？迫詣拥禎饪s儀EVA-60plus 50℃下氮氣吹干,，加入0.2M乙酸銨溶液5mL溶解，超聲混勻,，使殘渣充分溶解后備用,。
3 凈化
將MCX固相萃取柱安裝在Raykol Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀上，依次用甲醇3 mL,、水3 mL活化,。備用液全部過柱，用水2 mL,、2%甲酸水2ml,、甲醇2 mL依次淋洗，抽干,，用5％氨水甲醇溶液2 mL洗脫,，收集洗脫液，使用EVA-60plus全自動氮吹濃縮儀于40℃水浴氮氣吹干,，用10％乙腈水溶液（含0.1%甲酸）1.0 mL溶解,，濾過，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定,。具體的固相萃取方法見圖,。
結(jié)果與討論
為了驗證該方法的回收率,，本實驗分別在豬肉樣品中加入鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇,、萊克多巴胺,、特布他林4種混合標準品進行加標回收驗證(n=3)，加標水平為0.5ug/kg,，數(shù)據(jù)如表-2所示,。加標回收率在87.8-112.4%之間，RSD值控制在10%以內(nèi),。說明該方法能夠很好地運用于豬肉中瘦肉精殘留量的檢測,。
表-2.豬肉樣品加標回收率及RSD值
注：其中克倫特羅的內(nèi)標為克倫特羅-D9；沙丁胺醇,、特布他林與萊克多巴胺的內(nèi)標為沙丁胺醇-D3,。
本解決方案操作方便、提取和濃縮效率高,、回收率好,。符合GB/T 22286-2008《動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》要求。
食源性興奮劑的風(fēng)險控制不僅要依靠檢測標準,，還應(yīng)借鑒“預(yù)防為主”原則,，加強“從農(nóng)田到餐桌”整個鏈條中食品安全的監(jiān)控，與時俱進的檢測方法和技術(shù)手段的應(yīng)用利于防止誤食興奮劑事件的發(fā)生,，運動員得以吃得健康,、吃得安心。
參考文獻
[1]黃煒：運動員冬奧會期間不要吃中國肉,！反興奮劑機構(gòu)又來了……,觀察者網(wǎng)
[2]冬奧會食品符合食源性興奮劑“零檢出”特殊要求,新華每日電訊/2022 年/1 月/19 日/第 006 版
[3]嚴字當(dāng)頭“零容忍” 全力以赴“零出現(xiàn)”——心懷“國之大者”,，反興奮劑中心備戰(zhàn)北京冬奧會,國家體育總局反興奮劑中心
9
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)