FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒  

產(chǎn)品介紹：

適用于合成Realtime PCR用cDNA的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,。

本試劑盒是適用于Realtime PCR用cDNA制作的逆轉(zhuǎn)錄反應試劑盒。由于采用了本公司
高性能逆轉(zhuǎn)錄酶『ReverTra Ace』,，反應效率非常出色,。另外，通過改良,，使得帶入到
Realtime PCR反應體系中的逆轉(zhuǎn)錄反應液的影響降到小,，即使在PCR反應體系中添加
了多至20％體積的逆轉(zhuǎn)錄反應液，也能表現(xiàn)出良好的反應曲線,，因此,，適合用于表達量
較少的mRNA的高靈敏度測試。由于精簡了試劑盒的構(gòu)成,，可非常簡便地進行操作,，僅需
約15分鐘的逆轉(zhuǎn)錄反應，即可得到充分的cDNA,。

特征1. 超群的cDNA合成效率
由于使用了恰當比例的mix primer（oligo dT和Random primer）,、以及經(jīng)改良的反應緩沖液,，可實現(xiàn)高效率的逆轉(zhuǎn)錄反應。

特征2. 反應時間僅需15分鐘
逆轉(zhuǎn)錄反應僅需15分鐘即可完成,。此外,，即便是要除去對Realtime PCR反應有阻礙的殘留的模板RNA，也無須追加RNase H處理,。
特征3. 提高了和Realtime PCR試劑的適應性
通過改良,，使帶入到Realtime PCR反應體系的逆轉(zhuǎn)錄反應液的影響降到小。即使在PCR反應體系中添加了多至20% (V/V)的逆轉(zhuǎn)錄反應液,，也能表現(xiàn)出良好的反應曲線,。因此，適合用于表達量較少的mRNA的高靈敏度檢測,。

FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒 

規(guī)格參數(shù)Specifications

實驗例1 與用其他公司產(chǎn)品cDNA合成量的比較

以來源于HeLa細胞的total RNA 100ng為模板，根據(jù)各公司試劑盒推薦的條件進行逆轉(zhuǎn)錄反應,。然后,，在Realtime PCR反應液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分別添加上述的逆轉(zhuǎn)錄反應液各1% (V/V)，用Realtime PCR對β-Actin和Polymerase ε的cDNA量進行定量,。結(jié)果可見,，在使用本試劑盒的情況下，兩個目的片段都有high的收量,。 

 實驗例2 RNase H處理與否對檢測靈敏度影響的比較

以來源于HeLa細胞的total RNA 100ng為模板,，使用ReverTra Ace qPCR RT Kit（藍線）及另外添附RNase H的B公司cDNA合成試劑盒，按各自推薦的實驗步驟進行逆轉(zhuǎn)錄反應(B公司試劑盒分別按RNase H處理（紅線）/未處理（橙線）兩種方法進行),。然后,，按和實驗例1同樣的方法檢測β-Actin的擴增效果。結(jié)果顯示,，用B公司的試劑盒RNase H未處理（橙線）的情況下,，檢測效果大幅下降。而用ReverTra Ace qPCR RT Kit（藍線）進行反應,，即便不追加RNase H處理也能顯示出很高的擴增效率,。已經(jīng)過實驗證明，用本試劑盒的情況下,，RNase H處理與否靈敏度相等,。
※本試劑盒不包含RNase H處理步驟。

實驗例3 模板RNA量的添加量對合成效率影響的探討

在ReverTra Ace qPCR RT Kit的反應體系(10μl)中,，分別添加HeLa細胞由來的total RNA 0.5μg - 0.5pg,，分別進行逆轉(zhuǎn)錄反應。然后,，采用和實驗例2同樣的方法擴增β-Actin基因,。結(jié)果可見,，在探討的范圍內(nèi)，模板RNA的量和cDNA的收量密切相關(guān),，但無論模板RNA量的多寡,，仍可維持很高的cDNA合成效率。由此可見,，在目的片段濃度有差異的樣品之間,，逆轉(zhuǎn)錄反應效率的變化并不大，因此可將定量結(jié)果的誤差控制在小范圍內(nèi),。

簡要備注

Q1. 雖然反應時間僅需15分鐘,，但如果延長反應時間，是否可提高cDNA的合成量,？
A1. 要對tRNA等高表達量的RNA進行*逆轉(zhuǎn)錄時,，延長反應時間可提高合成量，但一般情況下按照標準的推薦條件37℃15分鐘即可,。
Q2. 可使用哪些模板RNA?  
 A2. Total RNA,、mRNA、tRNA,、rRNA等各種RNA都可以使用,。
Q.3 需要進行RNase H處理嗎?  
 A3. 由于殘留的模板RNA會阻礙PCR反應，所以一般情況下逆轉(zhuǎn)錄反應結(jié)束后都要通過RNase H分解模板RNA,。但本試劑盒運用本公司開發(fā)的新系統(tǒng),，在逆轉(zhuǎn)錄反應后可用非酶性方法除去模板RNA。因此,，逆轉(zhuǎn)錄反應后無需RNase H處理,。

 參考文獻

1）K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219−2226（2003）
2）A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66（2002）
3）S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246（2002）
4）S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460（2001）
5）Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675（2000）
6）S.Lee et al.,Gene,245:253−266（2000）

價格表

*反應體系為10μl時的反應次數(shù)。

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