核糖核酸酶A來源于牛胰腺

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

核糖核酸酶A（Ribonuclease A,，常用縮寫RNase A）,，一種含4個二硫鍵的單鏈多肽，分子量約為13.7kDa（氨基酸序列）,。作為一種核糖核酸內(nèi)切酶（endoribonuclease）,，特異性降解單鏈RNA上的胞嘧啶（C）或尿嘧啶（U）殘基。具體來說,，切割識別的是由某核苷酸上的5’-核糖和相鄰的嘧啶類核苷酸3’-核糖上磷酸基團形成的磷酸二酯鍵,，從而使得2’, 3’-環(huán)磷酸水解為對應(yīng)的3’-核苷磷酸（比如，pG-pG-pC-pA-pG經(jīng)RNase A切割產(chǎn)生pG-pG-pCp 和A-PG）,。RNase A切割單鏈RNA活性high,，推薦工作濃度為1-100μg/ml，兼容于各種反應(yīng)體系,。低鹽濃度（0-100mM NaCl）,，可用來切割單鏈RNA，雙鏈RNA,，以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈,。然而，高鹽濃度（≥0.3M）,，RNase A僅特異性切割單鏈RNA,。

核糖核酸酶A（RNase A）常見的應(yīng)用在于質(zhì)粒DNA或基因組DNA制備過程中去除RNA，此制備過程中DNase酶活性的存在與否是需要重視的污染之一,，可采用水浴煮沸這種傳統(tǒng)方法來滅活DNase活性,。另外，本品還可用于RNA酶保護分析,、RNA序列分析等分子生物學(xué)實驗,。

產(chǎn)品屬性

外觀：白色凍干粉末

激活劑：鈉鹽、鉀鹽等

抑制劑：核酸酶抑制劑

失活方法：加熱不會失活,，建議用離心柱或者酚氯fang抽提來充分去除

來源：牛胰腺

溶解性：溶于水（10mg/ml）

干燥失重：≤5.0%

酶活力：≥50 Kunitz units/mg   活性同sigma R4875

運輸和保存方法

冰袋運輸,。-20℃干燥保存，3年有效,。

注意事項

1） 本品在生產(chǎn)過程中已經(jīng)過相應(yīng)方法去除DNase污染,，對于常規(guī)質(zhì)粒DNA或者基因組DNA抽提（不需要嚴(yán)格定量DNA水平）的應(yīng)用，可不需要高溫煮沸,，直接配制母液即可,。對于需要嚴(yán)格控制DNase酶殘留的實驗，建議高溫煮沸或者購買DNase-free, protease-free的RNase A溶液（10mg/ml）

2） RNase A會強吸附在玻璃器皿上,，建議溶液裝到塑料離心管內(nèi),。

3） 對于同時操作完整RNA實驗的研究人員,，一定要謹(jǐn)防RNase A引入干擾試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4） 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

 儲存液制備

注意：此為RNase A儲存液配制的常用方法之一，也可以根據(jù)實驗室傳統(tǒng)的方法,，或者參考文獻資料使用其他方法制備儲存液（如直接溶于10mM Tris-Cl, pH7.5,；或者Tris-NaCl溶液）。

1） 利用10mM的醋酸鈉（pH5.2）制備10mg/ml 的RNase A 儲存液,；

2）  00℃加熱15min,；

3） 冷卻到室溫，加入1/10體積的1M Tris-HCl（pH7.4）,，調(diào)其pH至7.4（例如,，5ml 10mg/ml的RNase 儲存液加入500μl 1M Tris-HCl, pH7.4）；

4） 分裝于-20℃凍存,，可穩(wěn)定保存長達2年,。

注意：在中性條件下煮沸RNase A溶液，會有RNase沉淀形成,；在更低的pH下將其煮沸,，如有沉淀可以觀察到，可能由于蛋白雜質(zhì)存在造成,。煮沸之后若發(fā)現(xiàn)沉淀,，可通過高速離心（13,000 rpm）去除雜質(zhì)，然后分裝凍存

注意事項
為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
用途：本品僅供科研，不得用于其它用途,。