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免疫組化切片染色ABC Kit

簡介：

Santa 公司免疫組化染色ABC kit 適用于兔、山羊,、小鼠,、大鼠來源的一抗冰凍切片或石蠟切片顯色，一個盒子足夠染200張切片,。

產(chǎn)品信息：

試劑盒組成：(以ImmunoCruzT^M mouse ABC Staining System 為例)

1. 1ml正常封閉血清
2. 250ug 生物素標(biāo)記的二抗
3. 0.5ml親和素標(biāo)記HRP（AB試劑）
4. 1ml 50X過氧化物酶底物
5. 1ml 50X DAB顯色液
6. 3ml 10 X底物緩沖液
7. 用于工作液制備的小瓶

客戶需自備的試劑：

1. PBS緩沖液
2. 0.1-1%雙氧水,，溶于PBS、雙蒸水或甲醇
3. 一抗
4. 樣品固定試劑
5. 復(fù)染試劑（可選的）
6. 封片劑

操作流程：

所有步驟均在室溫操作,，用足夠的試劑浸潤切片,，一般100ul足夠或1-3滴工作液，避免在操作過程中樣本變干,。

1. （可選步驟）切片制備好以后,，切片需用0.1-1%的過氧化氫（溶于PBS，去離子水或甲醇）孵育5-10min,，以去除內(nèi)源性過氧化物酶活性,。用PBS沖洗兩次,，5min/次
2. （可選步驟）切片用1.5%封閉血清（溶于PBS）孵育1h,如果沒有出現(xiàn)非特異性染色，該步驟可省略,。
3. 切片用一抗室溫孵育30min或4℃孵育Overnight,。通過滴定法確定*的一抗稀釋度，推薦范圍：0.5-5ug/ml,，用1.5%封閉血清（溶于PBS）,。PBS洗滌3次，5min/次
4. 用生物素標(biāo)記的二抗孵育切片30min,，二抗?jié)舛燃s1ug/ml,，PBS洗滌3次，5min/次
5. 用AB酶試劑,，孵育切片30min, PBS洗滌3次,，5min/次
6. 用過氧化物酶底物溶液1-3滴孵育切片30s-10min或直至強(qiáng)顯色出現(xiàn)。如果需要的話,，加入更多的過氧化物酶底物溶液,，繼續(xù)孵育，用去離子水洗滌5min,。
7. (可選步驟) 蘇木精復(fù)染5-10s,，用去離子水洗滌數(shù)次。
8. （可選步驟）用酸乙醇脫色,，染成藍(lán)色,，水沖洗。
9. 對于石蠟包埋組織,，用以下方法脫水：a.2 x 95%10s,，2x*乙醇10s，3x二甲苯10s,。去除多余的二甲苯
10. 立即加入1-2滴封片劑,，蓋上蓋玻片，顯微鏡觀察,。