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血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多原因,，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性造成的,；而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中,，亦是造成血清沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量,。

若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管中，以400g稍微離心,，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜,。
支原體污染的來源包括工作環(huán)境的污染,、操作者本身的污染（某些支原體在人體是正常菌群）、培養(yǎng)基的污染,、被污染細(xì)胞造成的交叉污染,、實(shí)驗(yàn)器材的污染、制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染,，等等,。

體外生長(zhǎng)的細(xì)胞對(duì)微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有抵抗能力，因此培養(yǎng)基應(yīng)達(dá)到無化學(xué)物質(zhì)污染,、無微生物污染（如細(xì)菌,、真菌、支原體,、病毒等）,、無其他對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染（如抗體,、補(bǔ)體）。對(duì)于天然培養(yǎng)基,，污染主要來源于取材過程及生物材料本身，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格選材,，嚴(yán)格操作,。對(duì)于合成培養(yǎng)基，污染主要來源于配制過程,，配制所用的水,，器皿應(yīng)十分潔凈，配制后應(yīng)嚴(yán)格過濾除菌,。

由于體外培養(yǎng)細(xì)胞自身沒有抵抗污染的能力,，而且培養(yǎng)基中的抗生素抗污染能力有限，因而培養(yǎng)細(xì)胞一旦發(fā)生污染多數(shù)將無法挽回,。支原體污染后,，因?yàn)樗鼈儾粫?huì)使細(xì)胞死亡可以與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁,，細(xì)胞無明顯變化,，外觀上給人以正常感覺，實(shí)則細(xì)胞手到多方面潛在影響,，如引起細(xì)胞變形,，影響DNA合成，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等,。

組織細(xì)胞培養(yǎng)工作中,，可以從以下幾方面來預(yù)防支原體的污染：控制環(huán)境污染；嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作,；細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無菌,；在細(xì)胞培養(yǎng)基沖加入適量的抗生素。

抗生素主要用于消毒培養(yǎng)液,，是培養(yǎng)過程中預(yù)防微生物污染的重要手段,，也是微生物污染不嚴(yán)重時(shí)的“急救”方法。不同抗生素殺滅微生物不同,，應(yīng)根據(jù)需要選擇,。

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)破碎的細(xì)胞甚多，培養(yǎng)細(xì)胞需要頻繁改善營(yíng)養(yǎng)環(huán)境才能支持長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)時(shí),，應(yīng)該懷疑支原體污染,。支原體污染難以觀察特殊的外觀變化，培養(yǎng)液也不渾濁,。

支原體污染細(xì)胞后,，特別是重要的細(xì)胞株,，有必要清除支原體，常用方法有：抗生素處理,、抗血清處理,、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。要注意的是：支原體沒有細(xì)胞壁,，故作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,，如內(nèi)酰胺類、萬古霉素等是不敏感的,；對(duì)多粘菌素,、利福平、磺胺藥物普遍耐火物品,。對(duì)支原體zui有抑制活性抗生素是四環(huán)素類,、大環(huán)內(nèi)酯類等，氨基糖苷類,、氯霉素對(duì)支原體有較小的抑制作用,。必要時(shí)更換所有培養(yǎng)用物。通常,，濾過除菌的方法對(duì)支原體是沒有作用的,。

不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來源,，所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響,。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無法存活,。

5 何謂FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 兩者都是指胎牛血清,， FCS 乃錯(cuò)誤的使用字眼,， 請(qǐng)不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清,。HS (horseserum) 則是指馬血清,。

6 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5 % 或10% CO2？或根本沒有影響,？

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng),， 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2 濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時(shí),，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10 % CO2,；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時(shí)， 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞,。

7.Hank's 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,，不需要CO2培養(yǎng)箱,。原因是什么？Hank's 平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別,？

HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高,。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值,。Eagles液在空氣水平的CO2 中,，溶液會(huì)變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸,。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液,，,。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織，用Hanks液就可以了,。

8. 細(xì)胞之接種密度為何,？

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長(zhǎng)之一重要原因,。

9. 懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理,？

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中， 稀釋細(xì)胞濃度即可,，若培養(yǎng)液太多時(shí),， 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高， 直到無法容納為止,。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,， 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度， 重復(fù)前述步驟即可,。