Biocoat腫瘤侵襲系統(tǒng)
BD 產(chǎn)品貨號：354166, 354165
儲存和運輸：-20度儲存,，干冰運輸。
使用指南:
BD BiocoatTM 腫瘤侵襲系統(tǒng)由包被Matrigel基質(zhì)的特殊材質(zhì)BD FluoroBlok 熒光屏蔽8.0μm PET膜的培養(yǎng)小室組合而成,。BD BiocoatTM 腫瘤侵襲系統(tǒng)具有以下特點：提高腫瘤細胞侵襲實驗的通量,；自動化非破壞式的熒光檢測；節(jié)約抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物篩選的時間和勞動力,；高度可重復(fù)性：平均z’=0.7(24孔),；平均z’=0.66(96孔)；使用簡便：無需反復(fù)取液和操作,，僅需加入細胞、標(biāo)記物,，然后直接讀板,。
操作過程:
凍融
從-20℃冰箱中取出產(chǎn)品，使其自然升溫到室溫,。取出培養(yǎng)板在細胞小室內(nèi)加入到500μL 37℃預(yù)熱的PBS,，37℃無CO2環(huán)境下孵育2小時。解凍后,，小心去除小室內(nèi)的培養(yǎng)基,，避免破壞Matrigel基質(zhì)膜。
BD鈣黃綠素Calcein AM熒光染色劑后標(biāo)記法
細胞通過侵襲消化基質(zhì)膜后遷移到下小室,，采用熒光標(biāo)記定量細胞,。細胞的侵襲能力用終點計算法計算得到。對于采用實時動力曲線的計算,，推薦使用前標(biāo)記法,。
2.1 如步驟1準備培養(yǎng)板。
2.2 胰酶消化細胞單層后制得細胞懸液，溶于無血清DMEM培養(yǎng)基,，推薦濃度為5×104 cells/mL,。
2.3 上小室中加入500μL細胞懸液（2×104 cells）。
2.4 通過進樣口在下小室中加入750μL誘導(dǎo)劑,。
2.5 在37℃,，5%CO2 條件下孵育培養(yǎng)板和對照板20-22小時（由細胞類型決定）。
2.6 孵育后,，小心去除上小室中的培養(yǎng)基,。避免破壞Matrigel基質(zhì)膜?？梢酝ㄟ^反扣住培養(yǎng)板,，輕輕拍打，以使培養(yǎng)基的傾倒,。
2.7 將培養(yǎng)小室轉(zhuǎn)移到另一塊24孔板中,，該孔板含有0.5 mL每孔的4μg/mL 鈣黃綠素（溶于HBSS）。在37℃,，5%CO2的環(huán)境下培養(yǎng)一小時,。
3、DilC12（3）熒光染色劑預(yù)標(biāo)記法
細胞接種于孔板之前先用染色劑標(biāo)記,，可用于均一化實驗,，所產(chǎn)生的實時動力數(shù)據(jù)可揭示細胞通過基底膜侵襲的動力曲線，不需要分解和破壞各個時間點,。
3.1如1.所示凍融,。
3.2 10μg/mLDilC12(3)溶解于含10%FBS的DMEM中，37℃ 1小時標(biāo)記單層細胞,。
3.3 胰酶消化細胞單層,，制備細胞懸液，溶于無血清DMEM培養(yǎng)基,，濃度為1×105 cells/mL,。
3.4 上小室加入500μL細胞懸液（5×104cells）。
3.5通過進樣口在下小室加入750μL誘導(dǎo)劑,。
3.6 在37℃,，5%CO2環(huán)境下孵育培養(yǎng)板和對照板18-24小時（由細胞類型決定）。在549激發(fā)波長和565nm發(fā)射波長條件下進行熒光讀數(shù),。
4,、數(shù)據(jù)計算
侵襲率%=受趨化劑誘導(dǎo)通過Matrigel基質(zhì)膜的細胞平均相對熒光值/受趨化劑誘導(dǎo)通過未包被FluoroBlok熒光膜的細胞平均相對熒光值×100
注意：數(shù)據(jù)可以用相對熒光值RFU或侵襲百分比表示，后者在標(biāo)準化數(shù)據(jù)處理中更有用,。背景扣除,，計算平均背景值，將其從各個孔板中扣除。
自動化操作注意事項
BD Falcon FluoroBlok 24孔板培養(yǎng)小室系統(tǒng)能適用于自動化操作系統(tǒng),。蓋子可以用標(biāo)準機械手取走,，也可用吸力取走。為了避免各孔間污染,，孔板設(shè)定為一個統(tǒng)一的方向,。為了與培養(yǎng)小室匹配，確保Falcon的商標(biāo)均在2者上方,，面向同一個方向,。任何規(guī)格的槍頭都能達到小室的兩邊。包括50μL,，100μL,，200μL，250μL,，1000μL,。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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