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所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不能用于食用和醫(yī)療等

人B因子（BF）ELISA 試劑盒樣品收集、處理及保存方法： 對于培養(yǎng)細胞樣品：

1. 融解RIPA裂解液,，混勻,。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的zui終濃度為1mM,。

2. 對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍（如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗）,。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸,。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,，細胞就會被裂解。

對于懸浮細胞：離心收集細胞,，用手指把細胞用力彈散,。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞,。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀,。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管,，然后再裂解,。

3. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘,，取上清,，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作,。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠,，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升,。

人B因子（BF）ELISA 試劑盒樣品收集、處理及保存方法對于組織樣品：

1. 把組織剪切成細小的碎片,。

2. 融解RIPA裂解液,，混勻。取適當量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的zui終濃度為1mM。

3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。（如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量,。）

4. 用玻璃勻漿器勻漿,，直至充分裂解。

5. 充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘,，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作,。

6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強烈vortex使樣品裂解充分,。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分,。

注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物,，屬正常現(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物,。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗,；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗,。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,，例如NF-kappaB、p53等時,，通常不必進行超聲處理,，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子,。

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