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所有產(chǎn)品僅供科研使用,,不能用于食用和醫(yī)療等
小鼠瘦素(LEP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T
30pg/ml-800pg/ml
使用目的:
本試劑盒用于測定小鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中瘦素(LEP)含量,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠瘦素(LEP)水平。用純化的小鼠瘦素(LEP)
抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入瘦素(LEP),再與HRP標(biāo)記
的瘦素(LEP)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。
TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣
品中的瘦素(LEP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線
計算樣品中小鼠瘦素(LEP)濃度,。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(1600pg/ml) 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
小鼠瘦素(LEP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能
馬上進(jìn)行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
小鼠瘦素(LEP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋,。
800pg/ml 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
400pg/ml 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200pg/ml 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100pg/ml 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50pg/ml 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔,、
待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置 30 秒后棄去,,如此
重復(fù) 5次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3,。
8. 洗滌:操作同 5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),,OD 值為縱坐標(biāo),,在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結(jié)果,。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,,以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5.封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存,。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn),。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:,;2-8℃。
2.有效期:6個月
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