您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng),! 登錄| 免費注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當前位置:> 供求商機> 小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒
所有產(chǎn)品僅供科研使用,,不能用于食用和醫(yī)療等
小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍: 96T
25 ng/L-800 ng/L
使用目的: 本試劑盒用于測定小鼠組織勻漿樣本中腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。用純化
的小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中
依次加入腫瘤壞死因子α(TNF-α),再與 HRP 標記的腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體結(jié)
合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶
的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死
因子α(TNF-α)呈正相關,。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲
線計算樣品中小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度,。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(1600 ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫分析試劑盒標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋,。
800 ng/L 5 號標準品 150µl的原倍標準品加入 150µl標準品稀釋液
400 ng/L 4 號標準品 150µl的5 號標準品加入 150µl標準品稀釋液
200 ng/L 3 號標準品 150µl的4 號標準品加入 150µl標準品稀釋液
100 ng/L 2 號標準品 150µl的3 號標準品加入 150µl標準品稀釋液
50 ng/L 1 號標準品 150µl的2 號標準品加入 150µl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,,
然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置 30 秒后棄去,,如此
重復 5次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50µl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3,。
8. 洗滌:操作同 5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值),。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié):
計算
以標準物的濃度為橫坐標,,OD 值為縱坐標,,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果,。
3.各步加樣均應使用加樣器,,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內(nèi),,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存,。
7.嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,,以英文說明書為準。
保存條件及有效期1.試劑盒保存:,;2-8℃,。
2.有效期:6個月
上海信帆生物專業(yè)代理銷售“小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫分析試劑盒”全程提供技術指導,有質(zhì)量問題,,免費包退換,!提供免費代測服務!歡迎廣大科研用戶來電來函,!
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,,信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關企業(yè)負責,,化工儀器網(wǎng)對此不承擔任何保證責任,。
溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買產(chǎn)品前務必確認供應商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量,。