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當(dāng)前位置:> 供求商機> 人胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒
所有產(chǎn)品僅供科研使用,,不能用于食用和醫(yī)療等
人胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA Kit操作方法
用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過一夜,。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,下同),?! ?/span>
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,。然后洗滌,。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔),?! ?/span>
3 加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃孵育0.5~1小時,,洗滌,。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃ 10~30分鐘?! ?/span>
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號表示,。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。
問題1:如果我們檢測的樣本是組織樣本,,請問應(yīng)該選用什么來組織勻漿,濃度是多少? | |||||||
答:一般我們試劑盒的組織勻漿,都是按照10%進行勻漿,即1g組織加9ml的勻漿液,,勻漿液可以選取sheng理鹽水,,也可以選取PBS,但*是PBS,PH=7.2-7.4,濃度為0.01mol. | |||||||
問題2:請問我訂購了你們的試劑盒,但是樣本是分批次收集的,,我可以分批次實驗嗎,。 | |||||||
答:可以的,我們的試劑盒橫條是可拆卸的,,試劑盒使用之后放到2-8度冰箱保存,,下次可以繼續(xù)使用,但是建議是拆封之后一個月內(nèi)用完,。 | |||||||
問題3:請問各種標本的處理方式,,你可以發(fā)給我一下嗎? | |||||||
答:當(dāng)然可以,。標本要求如下: | |||||||
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進行檢測的樣本,,及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本,,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的,,-70℃凍存?zhèn)溆?。標本?yīng)避免反復(fù)凍融。 | |||||||
液體類標本: 包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細胞培養(yǎng)上清等。 | |||||||
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應(yīng)再次離心,。 | |||||||
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心。 | |||||||
3.尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實行,。 | |||||||
4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。 | |||||||
5.培養(yǎng)細胞:檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心,。 | |||||||
6.組織標本:切割標本后,,稱取重量。加入一定量的PBS,,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,,用手工或勻漿器將標本勻漿化,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。 | |||||||
7.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融. | |||||||
8.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。 |
人胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA Kit
上海信帆生物科技有限公司代理多種國外原裝ELISA試劑盒,,標準品,對照品,,生物試劑,,科研抗體,細胞株等,,生物耗材等,,其中包括sigma,R&D,ScienCell,ATCC,wak0,omega,Worthington,、MBI,、Bioworld、Calendon等國外各類公司的產(chǎn)品,。
人胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA Kit
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