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人血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒的計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),,在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實(shí)際濃度。
人血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒的注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,。
6.底物請(qǐng)避光保存,。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,,以英文說明書為準(zhǔn),。
問題1:如果我們檢測(cè)的樣本是組織樣本,請(qǐng)問應(yīng)該選用什么來組織勻漿,濃度是多少? | |||||||
答:一般我們?cè)噭┖械慕M織勻漿,,都是按照10%進(jìn)行勻漿,即1g組織加9ml的勻漿液,,勻漿液可以選取sheng理鹽水,也可以選取PBS,但*是PBS,PH=7.2-7.4,濃度為0.01mol. | |||||||
問題2:請(qǐng)問我訂購了你們的試劑盒,,但是樣本是分批次收集的,,我可以分批次實(shí)驗(yàn)嗎。 | |||||||
答:可以的,,我們的試劑盒橫條是可拆卸的,,試劑盒使用之后放到2-8度冰箱保存,下次可以繼續(xù)使用,,但是建議是拆封之后一個(gè)月內(nèi)用完,。 | |||||||
問題3:請(qǐng)問各種標(biāo)本的處理方式,你可以發(fā)給我一下嗎,? | |||||||
答:當(dāng)然可以,。標(biāo)本要求如下: | |||||||
在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定,。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本,,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本,,及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融,。 | |||||||
液體類標(biāo)本: 包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。 | |||||||
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應(yīng)再次離心。 | |||||||
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心,。 | |||||||
3.尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照此實(shí)行,。 | |||||||
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。 | |||||||
5.培養(yǎng)細(xì)胞:檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。 | |||||||
6.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,或組織蛋白萃取試劑,,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),,其余冷凍備用。 | |||||||
7.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融. | |||||||
8.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。 |
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