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大鼠纖維連接蛋白(FN)ELISA試劑盒,定量準確分析
本試劑盒僅供研究使用,。
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中纖維連接蛋白(FN)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠纖維連接蛋白(FN)水平,。用純化的大鼠纖維連接蛋白(FN)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入纖維連接蛋白(FN),,再與HRP標(biāo)記的纖維連接蛋白(FN)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的纖維連接蛋白(FN)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,通過標(biāo)準曲線計算樣品中大鼠纖維連接蛋白(FN)濃度。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標(biāo)準品(160ng/ml) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標(biāo)準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
大鼠纖維連接蛋白(FN)ELISA試劑盒,,定量準確分析
操作步驟
1. 標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80ng/ml | 5號標(biāo)準品 | 150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液 |
40ng/ml | 4號標(biāo)準品 | 150μl的5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液 |
20ng/ml | 3號標(biāo)準品 | 150μl的4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液 |
10ng/ml | 2號標(biāo)準品 | 150μl的3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液 |
5ng/ml | 1號標(biāo)準品 | 150μl的2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結(jié):
計算
以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo),,OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線,,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準物的濃度與OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果,。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),,如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準曲線,,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
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