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人載脂蛋白A1ELISA試劑盒,人apo-A1試劑盒
  • 人載脂蛋白A1ELISA試劑盒,人apo-A1試劑盒

貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-09-09 17:18:25

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所有產(chǎn)品僅供科研使用,,不能用于食用和醫(yī)療等

人載脂蛋白A1ELISA試劑盒
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產(chǎn)品中文:人載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒
產(chǎn)品英文:Human apoprotein A1,apo-A1 ELISA kit
貨號:XF00170B
規(guī)格:48T/96T
保質(zhì)期:6個月
保存條件:2到8度
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ELISA技術(shù)原理:以免疫學反應(yīng)為基礎(chǔ),,將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來.
1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記,。
2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,。
3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性,。
4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。再加入酶標記 的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。
5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。
6. 加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,,產(chǎn)物的量 與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),,故可根據(jù)呈色的深淺進行定 性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),,并且重復性好。
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樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心,。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,,稱取重量,。加入一定量的PBS,PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),,用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
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操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,,在*、第二孔中分別加標準品100μl,,然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻,;然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,,混勻;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,,混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,,濃度分別為30ng/L,20ng/L ,,10ng/L,,5ng/L, 2.5ng/L),。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用,。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘. 
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結(jié)果,。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,,以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存,。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9. 本試劑不同批號組分不得混用,。
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