NHS活化瓊脂糖凝膠FF

英文名稱：NHS activated-Berpharose FF

貨號(hào)：B2828

規(guī)格：10ml

1.      產(chǎn)品介紹

NHS-瓊脂糖凝膠FF是一種將瓊脂糖凝膠微球用NHS活化形成的生物親和層析分離

介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖極-好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu),，同生物活性大分子有很好的相容性,，具有載量高、非特異性吸附少和流速快等特點(diǎn),。本活化的瓊脂糖凝膠能溫和地同氨基基團(tuán)反應(yīng),，特別適合偶聯(lián)抗體、鏈霉親和素,、酶和核酸等功能性生物大分子,。

2.規(guī)格

1ml、10ml,、100ml,、500ml 使用方法

應(yīng)用舉例：

NHS-瓊脂糖凝膠FF偶聯(lián)抗體

①配制抗體：取100 mg IgG用10 ml偶聯(lián)緩沖液（0.2 M NaHCO3，0.5 M NaCl,，pH8.3）溶解,。

②偶聯(lián)反應(yīng)：取10 ml NHS-瓊脂糖凝膠FF，用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液,，之后立即加入到抗體偶聯(lián)溶液中,，4℃振蕩偶聯(lián)6 h或者偶聯(lián)過夜。

③封閉：上述溶液過濾,，用50 ml偶聯(lián)緩沖液清洗偶聯(lián)后的凝膠,，用10 ml封閉緩沖液（0.2 M NaHCO3，0.5 M NaCl,，0.5 M乙醇胺,，pH8.3）于室溫振蕩4 h（或者過夜）以封閉未偶聯(lián)的基團(tuán)，之后用20 ml蒸餾水清洗干凈即可,。

④檢測(cè)：用SDS-PAGE檢測(cè)偶聯(lián)前后的反應(yīng)液并計(jì)算偶聯(lián)效率,，偶聯(lián)好的填料根基特性測(cè)定功能和載量。

5.注意事項(xiàng)：

1)偶聯(lián)緩沖液可以是碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液,，但絕對(duì)不能使用氨基緩沖體系（如Tris-HCl緩沖液）,。

2)穩(wěn)定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3，可適當(dāng)提高偶聯(lián)溫度（如室溫）將偶聯(lián)時(shí)間縮短至1~2 h,。

3)如對(duì)配基的穩(wěn)定性不夠了解,，可以選擇不同pH值緩沖液和不同溫度，用0.5~1 ml配基相應(yīng)濃度的溶液,，在無(wú)填料的條件下模擬偶聯(lián)反應(yīng),，觀察溶液是否會(huì)產(chǎn)生沉淀。有沉淀產(chǎn)生說明偶聯(lián)效果不佳,，可適當(dāng)降低緩沖液pH值或溫度,。同時(shí)可以添加約5%的甘油或PEG保護(hù)蛋白，避免產(chǎn)生沉淀,。

4)根據(jù)偶聯(lián)蛋白的穩(wěn)定性選擇合適的偶聯(lián)pH值和溫度,。偶聯(lián)較適pH值為pH7.5~9.0，室溫或4℃均可,。提高偶聯(lián)溫度能夠提高配基的偶聯(lián)效率,。

5)偶聯(lián)蛋白溶液的濃度以5~15 mg/ml為佳。偶聯(lián)凝膠體積和配基溶液的體積比以1:0.5~1:2.0為佳,。

6)如果偶聯(lián)的配基不穩(wěn)定,，可于4℃振蕩偶聯(lián)1~12 h以維持配基的活性。偶聯(lián)配基后應(yīng)盡快清洗填料,，避免配基在高pH條件下失活,。

7)封閉緩沖液一般使用帶氨基的小分子試劑，如乙醇胺,、Tris等,。于pH8~9、室溫條件下封閉數(shù)小時(shí)可完-全封閉,。推薦封閉緩沖液：0.5 M乙醇胺,，0.5 M NaCl，pH8.3或0.1 M Tris-HCl,，pH8.5,。

8)偶聯(lián)中盡量使用溫和的混勻方式，如振蕩,、翻轉(zhuǎn)和旋轉(zhuǎn)等,，如使用磁力攪拌器或者機(jī)械攪拌，需要降低攪拌速度,，使填料能夠混勻完-全懸浮即可,，避免劇烈攪拌導(dǎo)致凝膠微球破碎。

9)NHS-瓊脂糖凝膠FF需現(xiàn)取現(xiàn)用，避免取出后放置時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致活性降低,。

10)僅供科研實(shí)驗(yàn)使用

NHS活化瓊脂糖凝膠FF