TTC染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)

TTC染色實(shí)驗(yàn)介紹：

TTC（2，3,，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感復(fù)合物,，1894年*合成用來(lái)檢測(cè)種子的生存能力，1958年開(kāi)始用來(lái)染色檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織的缺血梗塞,。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體,，與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色，而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降,，不能反應(yīng),，故不會(huì)產(chǎn)生變化呈蒼白

TTC染色實(shí)驗(yàn)步驟（僅供參考）：

1、動(dòng)物麻醉后立即取材,，冷凍PBS從左心室灌注,，整個(gè)灌注5分鐘內(nèi)必須完成；

2,、入-20℃冰箱中速凍20-30min,，便于切片；

3,、用手術(shù)-刀片或是刮胡刀片切片,，厚度2-3mm為宜；

4,、將切片置于TTC孵育液中,，放入37℃溫箱（不得高于40℃）或是水浴鍋中避光孵育15-30min,，隨時(shí)觀察，間隔數(shù)分鐘翻動(dòng)組織,，使其均勻接觸到染色液,；

5、組織成色后,，加入固定液終止反應(yīng)及保存組織，24h后拍照,。

染色結(jié)果：正常組織呈紅色,，梗死區(qū)呈蒼白色。

注意事項(xiàng)：

1,、標(biāo)本越新鮮越好,，動(dòng)物麻醉后取材需迅速，勿固定,，刀片宜薄而鋒利,，在冰箱中速凍的時(shí)間以能順利切片為宜，保持切片平整,；

2,、孵育液提前30min入37℃中水浴或是溫箱中加溫；

3,、染色后的標(biāo)本浸存于10%中性甲醛或是4%多聚甲醛中,，染色結(jié)果能保存數(shù)月，在陽(yáng)光下易褪色,；

4,、TTC染色液避光4℃可保存數(shù)月，可重復(fù)利用2-3次,。

TTC染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)