免疫熒光實驗代測服務

兔疫熒光技術是在免疫學,、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。它是根據抗原抗體反應的原理,，先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團,，再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質和定位,以及利用定量技術(比如流式細胞儀)測定含量,。

免疫熒光實驗說明：

1,、確認要做的是單標還是雙標.

2、免疫熒光拍照免費,。

3、免疫熒光要做預實驗,。

4,、全景掃描可看任意倍數。

冰凍切片熒光tunel+免疫熒光雙標實驗步驟

1,、 冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來復溫,，晾干水分，冷丙酮固定10min，待丙酮*干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次,，每次5min,。

2、 修復：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止液體流走）,，在圈內滴加蛋白酶K工作液（蛋白酶K儲存液用PBS 1:9稀釋）覆蓋組織,，37度溫箱孵育30min。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次,，每次5min,。

3、 破膜：切片稍甩干后在圈內滴加破膜工作液覆蓋組織,，常溫下孵育20min,，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min,。

4,、 加試劑1,2：按片子數量和組織大小取tunel試劑盒內適量試劑1 (TdT) 和試劑2(dUTP)按2:29混合（試劑1,2為現配現用），加到圈內覆蓋組織,，切片平放于濕盒內,，37℃恒溫孵育2小時，濕盒內加少量水保持濕度,。

5,、 BSA封閉:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min,，在圈內滴加用3%BSA均勻覆蓋組織,，室溫封閉30min。

6,、 加一抗：輕輕甩掉封閉液,，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內4°C孵育過夜,。（濕盒內加少量水防止抗體蒸發(fā)）

7,、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min,。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗覆蓋組織,，避光室溫孵育50min。

8,、 DAPI復染細胞核：切片用PBS（PH7.4）洗滌3次,，每次5min。去除PBS后在圈內滴加DAPI染液,，避光室溫孵育10min,。

9、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min,。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片,。

10、 鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像,。（紫外激發(fā)波長330-380nm,，發(fā)射波長420nm；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm,，發(fā)射波長515-555 nm,；CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm）

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