所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不能用于食用和醫(yī)療等

產(chǎn)品名稱：鐵離子比色法檢測試劑盒

產(chǎn)品貨號：XFP10451

產(chǎn)品規(guī)格：100T

儲存條件：4℃保存

細胞鐵離子檢測試劑盒可用于培養(yǎng)細胞中鐵離子定量檢測,。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細胞鐵離子，線性范圍5~300uM。產(chǎn)品包括標(biāo)準(zhǔn)品和空白對照,，本試劑盒可進行100個樣品的檢測,。鐵是人體必需的元素之一，對人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用,，血液中鐵的含量不足,，就會造成缺鐵性貧血,。鐵存在于人體所有的細胞內(nèi)，各組織,、器官包括各內(nèi)分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和肺組織內(nèi)含量較為豐富,。成人體內(nèi)含鐵3～5克,，大部分都以蛋白質(zhì)復(fù)合物形式存在，極少部分以離子的形態(tài)存在,。

檢測原理：

鐵與蛋白結(jié)合成復(fù)合物,，在酸性介質(zhì)中鐵從復(fù)合物中解離出來，再被還原劑還原成二價鐵,， 并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物,，在 540-580nm 處可比色測定。

產(chǎn)品組成：

 A. 細胞裂解液： 20 ml

B. 緩沖液： 5ml

C. 檢測劑： 3ml

D. 標(biāo)準(zhǔn)品： 1ml

E. 稀釋用液： 20ml 

實驗步驟：

1.  樣品準(zhǔn)備（以24孔板為例）：

將含鐵元素DMEM培養(yǎng)過的細胞用冷的PBS 2ml洗兩遍,，將PBS吸棄（若不馬上檢測可將其凍存于-20℃）,。200ul/孔裂解液裂解細胞，置于搖床裂解2h,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將3mM 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為：300 uM,、150uM、75uM,、37.5uM,、18.75uM,、9.38uM、4.69uM,。注意倍比稀釋并設(shè)置0濃度對照反應(yīng)管,。

3.  將緩沖液與4.5%高錳-酸鉀溶液按1:1混勻，稱為混液A,。 注意：用戶自備4.5%高錳-酸鉀溶液 5ml,。

4.  參考下表使用1.5ml離心管，設(shè)置空白對照管,、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管,。如果樣品中的鐵元素含量過高，用裂解液適當(dāng)稀釋后再進行測定,。

                           空白對照          稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品    裂解的樣品

稀釋用液                    100μl               － 

混液A                         100μl             100μl                    100μl

樣品                             －                   －                        100μl

標(biāo)準(zhǔn)品工作液               －                   100μl                     －

5.  混勻,，60℃ 孵育1h。

6.  冷卻至室溫,，將管蓋與管壁上的液滴離心入管底,。

7.  加入30ul 鐵離子檢測劑，混勻,，室溫孵育,，30min。

8. 取200ul 于96孔板,，在550nm測定吸光度,。如果不能測定550nm，也可以在540nm~580nm范圍內(nèi)檢測,。

9.  繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算鐵離子濃度,。

 本產(chǎn)品僅供科研實驗用，不做其它用途,！

鐵離子比色法檢測試劑盒