所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不能用于食用和醫(yī)療等

 組織樣本中甘油含量檢測(cè)試劑盒

 甘油測(cè)定

1. 參見下表加樣,。待測(cè)樣品體積 10µl,，多加可能會(huì)抑制反應(yīng),。

2. 37oC 或 25oC 反應(yīng) 10 分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60 分鐘內(nèi)穩(wěn)定,。

3. 先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零,，然后測(cè)定各管 OD 值。

4. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度,。

附 Excel 作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管 OD 值為 y 軸,，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 x 軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù),，點(diǎn)擊做圖向?qū)?，選擇-散點(diǎn)圖-,，點(diǎn)擊-完成-,。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn),，點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線-，點(diǎn)擊-選項(xiàng)-,，點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2 值-,。

5. 以每 mg 蛋白濃度或細(xì)胞數(shù)校正甘油含量。見說明書

說明：

1.血紅蛋白>2g/L,、膽紅素>0.25g/L,、二硫蘇糖醇、巰基乙醇,、高濃度EDTA干擾測(cè)試,。

2.紅細(xì)胞糖酵解時(shí)合成磷酸甘油影響測(cè)定。

原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油,，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化

氫,；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比,。

適用范圍：測(cè)定實(shí)體組織,、細(xì)胞中的甘油濃度,。組成 (105 次微板測(cè)定或 30 次 1 ml 比色杯測(cè)定)：

(1) 裂解液 50 ml

(2) R1 試劑 16 ml

(3) R2 試劑 4 ml

(4) 4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml

4 oC,，儲(chǔ)存 3 月。

所需設(shè)備：酶標(biāo)儀,、生化分析儀或 721,、722 型可

見光分光光度計(jì),。佳工作波長 550nm，如無此波

長建議優(yōu)先選用 570nm,、次選 530、490nm,。

一 組織細(xì)胞裂解

細(xì)胞(包括分化的脂肪細(xì)胞)裂解： 消化、離心收集細(xì)胞,。或直接在培養(yǎng)皿內(nèi)裂解,。通常6孔板單孔約2x106個(gè)細(xì)胞,，75cm2瓶約1x107細(xì)胞。按比例每 1~2 x 106細(xì)胞加 0.1ml 裂解液,，混勻,，靜置 10 分鐘。

動(dòng)物組織裂解：

切記要預(yù)先將新鮮組織切稱重后再進(jìn)行保存,。組織凍存后再進(jìn)行解凍、剪切,、稱重可能會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的測(cè)量誤差,。離心管精確稱重，加入組織塊后再稱重,，二者相減(即減量稱重法)計(jì)算組織量(約 100mg),。強(qiáng)烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差,。（注意；裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質(zhì)提?。?。用電動(dòng)高速勻漿器或手動(dòng)玻璃勻漿器破碎組織。（不推薦超聲方法,，因其不能*和均勻破碎,。應(yīng)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整初始的組織細(xì)胞加入量），而后,，靜置 10 分鐘,。

組織樣本中甘油含量檢測(cè)試劑盒