信帆生物提供：堿性磷酸酶（ALP）染色實(shí)驗(yàn)代測服務(wù)

服務(wù)介紹：ALP染色（堿性磷酸酶染色）是一種用于檢測細(xì)胞或組織中堿性磷酸酶（ALP）活性的實(shí)驗(yàn)方法,。ALP是一種廣泛存在于多種組織（如骨骼,、肝臟、腎臟和胎盤）中的酶,，其活性常被用作干細(xì)胞多能性、成骨細(xì)胞分化以及某些疾?。ㄈ绺尾『凸遣,。┑臉?biāo)志物。
檢測原理：
堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,，而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時偶聯(lián)法),，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解,，釋放出磷酸不萘酚,，后者不偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中,。該染液可用于血液,、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片,、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色,，堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色，位于胞槳,，結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠,。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1.、新鮮組織冰凍切片 6-8um 或者石蠟切片經(jīng)脫蠟至水洗,；
2,、放入孵育液中置于 37℃溫箱內(nèi)孵育。冰凍切片 10-30min,，石蠟切片 1-2h（陰性對照片用陰性對照孵育液）,；
3、蒸餾水稍洗,；
4,、配制ALP孵育液：按照1:1的比例混合B1:AS-BI染色液和B2:FBB染色液
5、切片如ALP固定液固定3min,，水洗,；
6、滴加配制好的ALP孵育液,，放入濕盒中,，避光孵育15~20min,，水洗；
7,、入核固紅染色液或甲基綠染色液復(fù)染3~5min,，水洗；
8,、冰凍切片用甘油明膠固定,；石蠟切片常規(guī)脫水、透明及封固,。
注意事項(xiàng)：
1,、樣本處理：確保樣本新鮮，并及時進(jìn)行固定處理,，避免影響酶的活性,。
2、染色液配制：ALP染色液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用,，避免長時間放置導(dǎo)致失效或降低陽性強(qiáng)度,。
3、實(shí)驗(yàn)條件控制：嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,，如溫度,、時間和pH值等，以確保染色效果的準(zhǔn)確性和可靠性,。
4,、陽性對照：每次染色時，應(yīng)設(shè)置陽性對照,，以便對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確判斷,。

僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其他用途,！