所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不能用于食用和醫(yī)療等

Western blot實驗代測,，WB實驗操作注意事項

免疫印跡（immunblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（western blot）,他是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù),。由于免疫印跡（western blot）具有

SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,，現(xiàn)在已成為蛋白分選的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡（western blot）常用于鑒定某種蛋白,，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分選,。

客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品， 檢測目的蛋白的一抗（常規(guī)指標(biāo)本公司提供一抗）,。樣品要求為：

1,、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。

2,、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。

3,、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml,。
 

Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供

內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖,，實驗報告,，包括整個試驗流程所涉及的實驗數(shù)據(jù)和實驗步驟。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù),，將提供檢測報告

Western blot實驗服務(wù)

服務(wù)內(nèi)容

我們提供從蛋白制備,、蛋白電泳到Western blot檢測的全流程服務(wù)，如需要還可進(jìn)行灰度分析,。

說明

1,、建議提供目的蛋白陽性表達(dá)樣品（純蛋白或有陽性表達(dá)的細(xì)胞或組織）作為陽性對照。

2、每張膜檢測1-8個樣品,。

3,、如果一抗由客戶提供，請在正確條件下保存,，避免污染及反復(fù)凍融,。

western blot (WB)服務(wù)須知： 
1. 樣本要求盡可能新鮮；
2. 樣本量：組織樣本,，質(zhì)量大于100mg,；細(xì)胞樣本，細(xì)胞數(shù)大于1×106,；
3. 您可自備一抗,，也可讓我公司代買。為保證質(zhì)量,，抗體醉好為進(jìn)口單克隆抗體,；
4. 服務(wù)時限和內(nèi)容：收到樣本之日起2-3周內(nèi)提交實驗結(jié)果，具體包括實驗方法,、步驟,、所用試劑、儀器,、圖片及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等,；
5. 報告提供：實驗結(jié)果將以電子或書面形式提交給您。

Western blot的原理 
   Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,，被檢測物是蛋白質(zhì),，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗,。經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品,，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變,。

   以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá),。

Western blot實驗代測,，WB實驗操作注意事項

為什么同一批次提取蛋白跑出的條帶不*？

這個問題很多老師在做western blotting的時候遇見過,，內(nèi)參*,，而目的條帶每次都不一樣,，原因可能是在顯影液環(huán)節(jié)，簡單來說就是你的膜沒有淋干凈,，上面殘留參差不齊的T/TBS,，T/TBS能稀釋顯影液，目的條帶本來表達(dá)量就少,，某一個點殘留的T/TBS稍微多一點就可能導(dǎo)致顯影效果下降,，所以建議在顯影液反應(yīng)前，盡量將膜上的洗膜液淋掉（當(dāng)然也不能讓膜干了,，要是實驗室富裕的話,，也可以多添點顯影液，效果一樣）,。

Western blot實驗代測,，WB實驗操作注意事項