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豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 | |||||||
本試劑盒含量是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測,。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,,加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,,然后加入底物A,、B,和酶結合物同時作用,。產生顏色,。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系 | |||||||
問題1:如果我們代測的樣本是組織樣本,請問應該選用什么來組織勻漿,濃度是多少? | |||||||
答:一般我們試劑盒的組織勻漿,,都是按照10%進行勻漿,即1g組織加9ml的勻漿液,,勻漿液可以選取生理鹽水,也可以選取PBS,但*是PBS,PH=7.2-7.4,濃度為0.01mol. | |||||||
問題2:請問試劑盒在zui后計算的時候,用一般試劑盒測要測組織蛋白濃度,,zui后計算出來的,我們的試劑盒是不是也需要這樣操作?具體怎么計算? | |||||||
答:對于組織樣本來講,,我們建議做蛋白定量.然后把測得的結果比上蛋白定量的結果,zui終得到每g蛋白中含有指標的量,這樣更為準確!如果不做蛋白定量的話,就是得到每g組織中含有量! | |||||||
問題3:請問我訂購了你們的試劑盒,,但是樣本是分批次收集的,,我可以分批次實驗嗎。 | |||||||
答:可以的,,我們的試劑盒橫條是可拆卸的,,試劑盒使用之后放到2-8度冰箱保存,下次可以繼續(xù)使用,,但是建議是拆封之后一個月內用完,。 | |||||||
問題4:請問各種標本的處理方式,你可以發(fā)給我一下嗎,? | |||||||
答:當然可以,。標本要求如下: | |||||||
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,。對收集后當天就進行檢測的樣本,,及時儲存在4℃?zhèn)溆谩τ诟籼煸贆z測的樣本,,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,,-70℃凍存?zhèn)溆谩吮緫苊夥磸蛢鋈凇?/td> | |||||||
液體類標本: 包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、腦脊液,、細胞培養(yǎng)上清等。 | |||||||
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應再次離心,。 | |||||||
2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心,。 | |||||||
3.尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心。胸腹水,、腦脊液參? 照此實行,。 | |||||||
4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。 | |||||||
5.培養(yǎng)細胞:檢測細胞內的成份時,,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,,以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,,應再次離心,。 | |||||||
6.組織標本:切割標本后,稱取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,,用手工或勻漿器將標本勻漿化,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,,其余冷凍備用。 | |||||||
7.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融. | |||||||
8.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。 | |||||||
問題5:麻煩把試劑盒的具體操作步驟發(fā)給我一下,,謝謝! | |||||||
答:好的,,詳細的操作步驟如下: | |||||||
1. 加樣:標準品設定5個濃度點10個孔,,每個濃度設定平行孔,加入50微升不同濃度的標準品,,空白孔設定1個孔加入50微升蒸餾水(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、待測樣品孔,,在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。 | |||||||
2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。 | |||||||
3. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用,。 | |||||||
4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復5次,,拍干,。 | |||||||
5. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外,。 | |||||||
6. 溫育:操作同3,。 | |||||||
7. 洗滌:操作同5。 | |||||||
8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. | |||||||
9. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(此時藍色立轉黃色),。 | |||||||
10. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。 | |||||||
豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 | |||||||
問題6:試劑盒操作過程中有什么注意事項嗎? | |||||||
答:有的,,具體的注意事項如下: | |||||||
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,,板條應裝入密封袋中保存,。 | |||||||
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結果,。 | |||||||
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,,以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣,。 | |||||||
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。 | |||||||
5. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染。 | |||||||
6. 底物請避光保存,。 | |||||||
7. 嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. | |||||||
8. 所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 | |||||||
9. 本試劑不同批號組分不得混用,。 | |||||||
11. 如與英文說明書有異,,以英文說明書為準。 | |||||||
問題7:請問操作完之后,,應該怎么計算呢,? | |||||||
答:你好,操作完成之后,,詳細的計算方式是:以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實際濃度,。 | |||||||
問題8:請問你們試劑盒的性能如何? | |||||||
答:試劑盒性能的性能我們是通過幾個數(shù)值反應的:1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990以上,。2.批內與批間應分別小于9%和11% | |||||||
豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 | |||||||
上海信帆生物公司主要代理產品: | |||||||
ELISA試劑盒:進口ELISA試劑盒,國產ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒等,。 | |||||||
培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等,。 | |||||||
血清:胎牛血清,科研血清,動物血清,NQBB,Hyclone,,Gbico原裝血清 ,。 | |||||||
生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進口試劑。 | |||||||
標準品對照品:進口對照品,進口對照藥材,進口標準品. | |||||||
抗體:一抗,二抗,,流式抗體等,。 | |||||||
放免試劑盒:進口放免試劑盒,國產放免試劑盒,,進口美國鳳凰等放免試劑盒,。 | |||||||
實驗室代測服務:放免代測,WB實驗,,免疫組化代測,,熒光定量PCR代測,病理細胞染色代測,,生化實驗代測等,。 |
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