原位雜交（FISH三標(biāo)）

服務(wù)介紹：

原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程,。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)采用三種標(biāo)記不同熒光素的不同探針,，同時(shí)檢測(cè)一個(gè)樣本,。適用于各類(lèi)細(xì)菌檢測(cè)和其他基因檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)流程：

1,、污泥切片固定：切片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min,，于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min,。

2,、消化：基因筆畫(huà)圈，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化20min,。純水沖洗后PBS洗3次×5min,。.

3、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液37°恒溫箱1h,。

4,、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針1,，探針2,，探針3雜交液，37度雜交過(guò)夜,。

5,、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC,，37°C 洗10min,，1×SSC，37°C洗2×5min,，0.5×SSC 37°洗10min,。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌

6,、DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液,，避光孵育8min,，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

7,、熒光全景掃描,。　

送樣要求：

1,、切片前處理要求：新鮮組織干冰運(yùn)輸后做冰凍切片,；或取2mm左右厚度的新鮮組織，5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定,，4℃低溫保存運(yùn)輸,，切勿冷凍結(jié)冰，盡快包埋切片后進(jìn)行原位雜交實(shí)驗(yàn),，固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)影響核酸檢出率；

2,、冰凍切片：冰凍切片-20℃運(yùn)輸,；

3、石蠟切片：石蠟切片常溫運(yùn)輸,；

4,、細(xì)胞爬片：細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，換無(wú)酶PBS,，密封,，4℃運(yùn)輸。 

單據(jù)填寫(xiě)：

1,、探針合成：需提供待測(cè)目的基因序列或基因登錄號(hào),、所需標(biāo)記類(lèi)型；

2,、自帶探針需告知完整探針信息,；

3、寫(xiě)明檢測(cè)要求,。