服務(wù)介紹：

原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,，從而對特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程,。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行,。

原位雜交(FISH雙標(biāo))可以檢測兩個靶基因的共定位情況。

實驗流程：

細(xì)胞爬片熒光探針原位雜交雙標(biāo)實驗步驟

1,、細(xì)胞爬片固定：細(xì)胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min,，于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min,。

2,、消化：基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性,，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min,。純水沖洗后PBS洗3次×5min。.

3,、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液37°恒溫箱1h,。

4、雜交：傾去預(yù)雜交液,，滴加含探針1雜交液,，37度雜交過夜。

5,、雜交后洗滌：洗去雜交液,，2×SSC，37°C 洗10min,，1×SSC,，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min,。若非特異雜交體較多,，可以增加甲酰胺洗滌

6、雜交：傾去預(yù)雜交液,，滴加含探針2雜交液,，37度雜交過夜。

7,、DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液,，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片,。

8,、鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm,，發(fā)射波長420nm,發(fā)藍(lán)光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm,，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm,，發(fā)紅光,。)　　

送樣要求：

1,、切片前處理要求：新鮮組織干冰運輸后做冰凍切片,；或取2mm左右厚度的新鮮組織，5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定,，4℃低溫保存運輸,，切勿冷凍結(jié)冰，盡快包埋切片后進(jìn)行原位雜交實驗,，固定時間過長影響核酸檢出率,；

2、冰凍切片：冰凍切片-20℃運輸,；

3,、石蠟切片：石蠟切片常溫運輸；

4,、細(xì)胞爬片：細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后,，換無酶PBS，密封,，4℃運輸,。 

單據(jù)填寫：

1、探針合成：需提供待測目的基因序列或基因登錄號,、所需標(biāo)記類型,；

2、自帶探針需告知完整探針信息,；

3,、寫明檢測要求。